煙草中與大豆疫霉菌激發(fā)子蛋白互作基因的篩選.pdf

1、由大豆疫霉菌引起的根腐病是影響世界大豆生產的毀滅性病害之一，利用抗病品種是控制該病害最經濟和有效的措施。然而，由于大豆疫霉菌小種的高度變異性導致品種抗性極易喪失，挖掘持久性抗病基因己成為抗病育種的難題。因此，找到非寄主對大豆疫霉菌抗性反應的關鍵基因，就可能利用基因工程手段創(chuàng)造廣譜和持久的抗性材料。本研究的目的就是尋找非寄主煙草對大豆疫霉菌信號識別和抗性反應相關的基因，為從分子水平上解釋非寄主對大豆疫霉菌抗性的機理提供依據。本研究獲得了以

2、下主要結果： 1.為尋找大豆疫霉激發(fā)素(Elicitin)蛋白的受體，構建了用于酵母雙雜交系統(tǒng)的“誘餌”載體，并檢測其是否具有毒性和自激活作用。通過PCR從含大豆疫霉激發(fā)素基因的TOPO質粒中擴增出目的片段，并將目的片段按正確方向插入誘餌載體PGBKT7中，重組質粒導入酵母菌株AH109，檢測其表達產物對酵母細胞中的報告基因有無激活作用以及對酵母有無毒性。結果表明含激發(fā)素蛋白的誘餌載體對酵母菌株AH109的報告基因無自激活作用，

3、且對酵母細胞無毒性。該研究為進一步從植物cDNA文庫篩選尋找與激發(fā)素相互作用的受體蛋白奠定了基礎。 2.以普通煙草k326為材料，用SMARTTMcDNA Library Construction Kit合成煙草cDNA。提取RNA與合成產物經電泳檢測表明：提取的總RNA比較完整，純度較高。LD-PCR產物主要集中在0.5～5kb之間，符合構建文庫要求。 3.利用酵母雙雜交技術從煙草中篩選了與類激發(fā)素PPSE7和激發(fā)素S

4、OJB互作的蛋白。PPSE7和SOJB分別從煙草篩選出了11個和14個蛋白；PPSE7和SOJB在煙草中存在幾個相似的結合蛋白，表明二者具有共享的生物功能。在煙草中，SOJB能與蛋白質降解有密切關系的兩個蛋白一肽酶和泛素結合蛋白互作，而PPSE7沒有篩選到類似蛋白，這與本研究中SOJB的作用相符。SOJB和PPSE7均能與跨膜運輸?shù)鞍捉Y合，PPSE7與水通道蛋白，SOJB則與銅離子轉運蛋白互作，表明二者在胞質內存在作用靶標。 4