異氟醚對人口腔癌細胞系生物學特性影響的實驗研究.pdf

1、口腔癌是位居全身惡性腫瘤發(fā)病率的第六位，由于口腔癌的發(fā)病部位通常位于體表或者接近患者的體表部位，所以會嚴重影響口腔癌患者的正常生理功能和社會交往。口腔癌的治療方式包括外科手術治療、放射治療、免疫治療、基因治療等等，但是在這些治療方法中，外科手術治療仍是占據(jù)著最重要的地位，也是最主要的治療方法。靜吸復合麻醉技術廣泛應用于口腔癌的手術麻醉，靜吸復合麻醉技術能夠更好地維持患者術中的血流動力學穩(wěn)定，同時患者有更快地術后恢復以及減少單一麻醉方式的

2、麻醉藥用量。異氟醚麻醉效能較強，血氣分配系數(shù)低，易于控制術中的麻醉深度，故而廣泛應用于靜吸復合麻醉中。以往的多數(shù)研究表明，異氟醚具有誘導細胞凋亡的能力，異氟醚能夠誘導新生大鼠神經元的廣泛凋亡，同時能夠誘導體外培養(yǎng)的淋巴細胞的凋亡；然而也有部分文獻報道了異氟醚同時還具有抑制細胞凋亡的能力，異氟醚能夠抑制應激狀態(tài)下心肌細胞的凋亡。大部分口腔癌手術都需要進行同側或對側的頸淋巴結清掃術，因而手術持續(xù)時間一般較長，在手術麻醉中，靜吸復合麻醉中的吸

3、入麻醉藥異氟醚是否會對口腔癌細胞的生物活性產生一定影響呢，是否影響口腔癌細胞的凋亡過程尚未見報道。
　　目的：
　　本研究的目的旨在通過觀察臨床相關濃度的異氟醚對體外培養(yǎng)的口腔癌細胞系Tca8113和HSC2細胞的生物學行為的影響，為臨床口腔癌手術選用更合理的復合麻醉方案和更合適的麻醉藥提供細胞水平的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)：用來觀察異氟醚對口腔癌細胞系Tca8113和HSC2細胞增殖能力的影響，

4、同時用來觀察Tca8113和HSC2細胞系的細胞周期。
　　2.流式細胞術：用來觀察異氟醚對口腔癌細胞系Tca8113和HSC2細胞凋亡能力的影響。
　　3.Transwell小室：用來觀察異氟醚對口腔癌細胞系Tca8113和HSC2細胞凋亡能力的影響。
　　4.westernblot：用來觀察異氟醚影響口腔癌細胞系Tca8113和HSC2細胞凋亡時細胞通路的研究。
　　結果：
　　1.在細胞增殖實驗中，T

5、ca8113和HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，繼續(xù)培養(yǎng)72h，以保證細胞系經過了兩個細胞周期以上的細胞增殖過程，來觀察細胞增殖能力的變化。實驗結果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無論是Tca8113細胞系，還是HSC2細胞系，細胞的增殖能力均發(fā)生了變化。Tca8113細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的Tca8113細胞比，暴露組的細胞增殖能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.0

6、5）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細胞增殖能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的HSC2細胞比，暴露組的細胞增殖能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細胞增殖能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。結果證實了異氟醚能夠在體外細胞水平上增強

7、口腔癌細胞系的細胞增殖能力。
　　2.在細胞凋亡實驗中，Tca8113和HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，立即進行細胞凋亡的流式細胞儀檢測。實驗結果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無論是Tca8113細胞系，還是HSC2細胞系，細胞的凋亡均發(fā)生了變化。Tca8113細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的Tca8113細胞比，暴露6h組的細胞凋亡水平顯著降低，且降低具有顯著性差異（p<0

8、.05）；而暴露3h組的凋亡水平與未接受暴露異氟醚的對照組沒有顯著性差異（p>0.05）。HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的HSC2細胞比，暴露組的凋亡均顯著降低，且降低均有顯著性差異（p<0.05）。HSC2細胞暴露2.0％異氟醚3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細胞凋亡水平降低更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。結果證實了異氟醚能夠在體外細胞水平上抑制口腔癌細胞系的

9、細胞凋亡。
　　3.在細胞侵襲實驗中，Tca8113和HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，消化、離心、重新稀釋成細胞懸液后接種于transwell小室的上室，放入細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24h，用HE染色的方法觀察細胞穿越基底膜到達transwell下室的細胞個數(shù)。實驗結果首次發(fā)現(xiàn)接受2.0％異氟醚暴露后，無論是Tca8113細胞系，還是HSC2細胞系，細胞的侵襲能力均發(fā)生了變化。Tca8113細胞系接受2.0％異氟醚暴露3

10、到6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的Tca8113細胞比，暴露組的細胞侵襲能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的細胞侵襲能力增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的HSC2細胞比，暴露組的細胞侵襲能力均顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組之間細胞的

11、侵襲能力相比，兩組之間沒有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p>0.05）。結果證實了異氟醚能夠在體外細胞水平上增強口腔癌細胞系的細胞侵襲能力。
　　4.在細胞凋亡相關分子研究的實驗中，Tca8113和HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，收集細胞，提取細胞的總蛋白，通過westernblot方法來檢測細胞水平凋亡相關蛋白Bcl-2的表達。結果顯示接受2.0％異氟醚暴露后，無論是Tca8113細胞系，還是HSC2細胞系，細胞的Bcl

12、-2蛋白均發(fā)生了變化。Tca8113細胞系接受2.0％異氟醚暴露3～6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的Tca8113細胞比，暴露組的Bcl-2蛋白顯著增高，且增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的Bcl-2蛋白增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。HSC2細胞系接受2.0％異氟醚暴露3到6h后，與對照組沒有接受異氟醚暴露的HSC2細胞比，暴露組的Bcl-2蛋白顯著增高，且

13、增高均有顯著性差異（p<0.05）。暴露3h組和暴露6h組相比，暴露6h組的Bcl-2蛋白增高更為明顯，兩組相比具有統(tǒng)計學上的顯著性差異（p<0.05）。結果說明異氟醚可能通過影響B(tài)cl-2/Bax通路在體外影響培養(yǎng)的口腔癌細胞系細胞的凋亡。
　　結論：
　　綜上所述，2.0％異氟醚能夠在體外增強口腔癌細胞的細胞增殖和細胞侵襲的能力，同時抑制了口腔癌細胞的細胞凋亡。這些結果表明在接受2.0％的異氟醚暴露后，口腔癌細胞的惡性程