黃芩莖葉總黃酮抗高甘油三酯血清刺激的血管平滑肌細胞增殖的作用及機制研究.pdf

1、目的： 1.研究人單純高甘油三酯(HTG)血清對大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(VSMCs)增殖的影響，并探討此病理狀態(tài)下細胞內(nèi)生物學(xué)變化。 2.探討血紅素氧合酶-1/-氧化碳(HO-1/CO)系統(tǒng)對單純高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的保護作用及分子機制。 3.觀察黃芩莖葉總黃酮(SSTF)對單純高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的影響，并探討其可能的作用機制。 方法： 傳代培養(yǎng)的大鼠胸主動脈VS

2、MCs，用人單純高甘油三酯血清誘導(dǎo)其增殖，觀察氯化血紅素(Hm，HO-1誘導(dǎo)劑)、鋅原卟啉-9(Znpp-IX，HO-1抑制劑)以及SSTF對單純HTG刺激的VSMCs增殖的影響，并探討其可能的作用機制。實驗分為正常血清組(C組)、高甘油三酯血清組(HTG組)、鋅原卟啉組(HTG+Znp組)、濃度梯度血紅素組(HTG+Hm組)、單純血紅素組(C+H3組)及濃度梯度藥物組(HTG+TF組)。采用四唑氮(MTT)比色法試驗檢測VSMCs增殖

3、；運用流式細胞術(shù)檢測細胞增殖周期及增殖指數(shù)；采用透射電鏡技術(shù)觀察細胞超微結(jié)構(gòu)的變化；運用酶聯(lián)免疫法檢測培養(yǎng)上清液中碳氧血紅蛋白(COHb)的含量；通過Western blot檢測HO-1及ERK/p-ERK蛋白的表達。 結(jié)果： 1.MTT結(jié)果顯示，與C組相比，加入HTG吸光度值(A值)顯著增高(P<0.01)：與HTG組比較，HTG+Znp組A值顯著增高(P<0.01)，HTG+Hm組A值則顯著降低(P<0.01)，且呈

4、時間劑量依賴性。而單加入最大濃度Hm，與C組相比，C+H3組A值無明顯變化。SSTF顯著抑制HTG誘導(dǎo)的細胞增殖(P<0.01)，呈時間劑量依賴性。 2.流式細胞術(shù)結(jié)果顯示，加入HTG明顯刺激VSMCs細胞周期進展。與C組比較，G0/G1期細胞百分率明顯減少，S期、G2/M期細胞百分率顯著增加，增殖指數(shù)也明顯升高(P<0.01，P<0.05)；加入HTG同時加入Znpp-IX，更顯著刺激細胞周期進展(P<0.01)。相反，加入H

5、TG同時加入濃度梯度的Hm明顯抑制細胞周期進展，與HTG組比較，G0/G1期VSMCs百分率明顯增多，S期、G2/M期VSMCs百分率顯著減少，增殖指數(shù)也明顯降低(P<0.05，P<0.01)，呈劑量依賴趨勢。單加入最大濃度Hm，細胞周期變化與C組相似(P>0.05)；加入SSTF明顯抑制VSMCs細胞周期進展(P<0.01)，但HTG+TF組對細胞周期的阻滯作用不及HTG+H3組(P<0.05，P<0.01)。 3.透射電鏡技

6、術(shù)觀察到正常血清組VSMCs細胞核較大，呈橢圓、分葉或不規(guī)則形，細胞器豐富，胞內(nèi)含大量成網(wǎng)狀的微管。HTG組細胞核核膜不同程度凹陷，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體及線粒體明顯增多，有些粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈不同程度的囊性擴張，胞漿內(nèi)可見有許多大小不一的脂滴，胞膜下有吞飲小泡，肌絲成份較少。 4.與Control組相比較，僅加入HTG時COHb含量無顯著性變化(P>0.05)，單加入Hm時COHb含量卻顯著增加(P<0.01)；與Control組及HT

7、G組比較，加入濃度梯度的Hm后COHb含量明顯增加，且呈時間劑量依賴關(guān)系(P<0.01)，而Znpp-IX則顯著降低COHb含量(P<0.01)。加入SSTF能明顯提高VSMCs COHb的生成(P<0.01)，但HTG+TF組細胞COHb的產(chǎn)量不及HTG+H3組(P<0.01)。 5.Western blot結(jié)果顯示，Control組、HTG組及HTG+TF組可見少量HO-1蛋白的表達，兩組間比較無顯著差異(P>0.05)，H

8、TG+ZnP組完全抑制HO-1蛋白的表達；與Control組及HTG組相比，Hm組HO-1蛋白表達顯著增高，呈劑量依賴趨勢(P<0.01)。另外，HTG組較Control組ERK/p-ERK蛋白的表達明顯增高(P<0.01)。與HTG組比較，HTG+ZnP組ERK/p-ERK蛋白的表達明顯增高(P<0.01)：相反，Hm組ERK/p-ERK蛋白表達則明顯減少，呈劑量依賴趨勢(P<0.01)；HTG+TF組ERK/p-ERK蛋白表達也明顯