影響綿羊卵丘細(xì)胞核移植效果主要因素的研究.pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)對(duì)于動(dòng)物育種、保種和瀕危動(dòng)物保護(hù)以及發(fā)育生物學(xué)等基礎(chǔ)理論的研究均有重要意義。 所有的細(xì)胞擁有同一套基因組，它們都來(lái)源于受精卵，但表型卻不相同。這是通過(guò)表觀遺傳機(jī)制完成。已經(jīng)在許多物種中證明，通過(guò)體細(xì)胞核移植，成功的重編程可使分化的體細(xì)胞回到全能狀態(tài)。盡管多種體細(xì)胞核移植動(dòng)物已經(jīng)誕生，但核移植效率很低。目前普遍認(rèn)為核移植動(dòng)物胚胎基因組表觀重編程異常是核移植效率低的主要原因。 本研究主要探討了化學(xué)輔助去核時(shí)，

2、秋水仙胺的最佳濃度；二甲基亞砜(Dimethylsulfoxide；DMSO)和胎牛血清(Fetal Bovine Serum；FBS)對(duì)核移植胚胎體外發(fā)育的影響，以及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑——5-氮-2′-脫氧核苷對(duì)綿羊卵丘細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育的影響。 研究發(fā)現(xiàn)用0.5μg/ml秋水仙胺處理綿羊卵母細(xì)胞0.5h，可使卵母細(xì)胞核區(qū)形成胞質(zhì)突起率最高(P<0.01): 化學(xué)激活液中DMSO的含量增加到1％或2％，卵裂率比

3、不添加組提高(P<0.01)，添加1％DMSO組囊胚率最高(P>0.05)； 在有糖的胚胎發(fā)育液中添加10％FBS，囊胚率極顯著提高(P<0.01)； 體細(xì)胞核移植胚胎的甲基化水平高于體內(nèi)正常受精的胚胎，分化的體細(xì)胞的甲基化水平高于精子和卵子。使用DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑——5-氮-2′-脫氧核苷(5-aza-2'-deoxycytidine；5-aza-dC)處理核供體細(xì)胞和核移植重構(gòu)胚胎，來(lái)降低它們的DNA甲基化水平

4、，可能會(huì)使核移植重構(gòu)胚的甲基化水平接近體內(nèi)正常受精胚胎水平，從而提高核移植效率。用不同濃度(0至0.02μM)5-氮-2-脫氧核苷處理綿羊卵丘細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)0.01μM 5-氮-2′-脫氧核苷處理組囊胚發(fā)育率極顯著高于其他處理組(P<0.01)；但各組間卵裂率和桑椹胚率差異不顯著(P>0.05)； 用不同濃度5-氮-2′-脫氧核苷處理綿羊核移植重構(gòu)胚胎，發(fā)現(xiàn)0.01μM 5-氮-2′-脫氧核苷處理組囊胚發(fā)育率極顯著高于其他處理組(P