同型半胱氨酸對大隱靜脈平滑肌細胞生長的影響及染料木黃酮的干預作用.pdf

1、本文論述了同型半胱氨酸對大隱靜脈平滑肌細胞生長的影響及染料木黃酮的干預作用，主要內容如下： 第一部分同型半胱氨酸對大隱靜脈平滑肌細胞生長的影響 目的：研究同型半胱氨酸(Hcy)對原代培養(yǎng)的大隱靜脈平滑肌細胞(GSVSMC)增殖及凋亡的影響，尋找合適的促使GSVSMC增殖的濃度及時間。 方法：采用貼塊法原代培養(yǎng)GSVSMC，倒置相差顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，并用肌動蛋白免疫熒光法對培養(yǎng)細胞進行鑒定。選擇生長良好的第

2、3～4代細胞進行實驗，分為(1)空白對照組：DMEM培養(yǎng)基；(2)Hcy濃度組：不同濃度的Hcy(100gmol/L、2001xmol/L、5001μnol/L、10001μnol/L)培養(yǎng)細胞24h；(3)Hcy時間組：500μmol/L的同型半胱氨酸，培養(yǎng)不同的時間(6h、12h、24h、48h)。用MTT法測定光吸收度，計算細胞生長增殖率。采用流式細胞儀AnncxinV/PI雙標記染色法分析Hcy對GSVSMC凋亡率的影響。

3、 結果：1.正常細胞生長良好，呈放射性生長，呈現SMC典型的“峰”、“谷”樣生長。a-actin免疫熒光法染色可見細胞胞漿內均有綠色熒光，證實為SMC，細胞純度在90％以上。 2.MTT實驗顯示，在作用時間相同的條件下，隨著Hcy作用濃度的增加，GSVSMC的增殖越明顯，存在著濃度依賴性效應關系，但500μmol/L與1000μmol/L時其差異沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在Hcy濃度相同的條件下，隨著作用時間的延長，GS

4、VSMC的增殖越明顯。 3.流式細胞儀結果顯示，在作用時間相同的條件下，GSVSMC的凋亡率隨Hcy濃度增加而降低，但500μmol/L與1000μmol/L時其差異沒有統(tǒng)計學意義；在作用濃度相同的條件下，GSVSMC的凋亡率隨Hcy的作用時間延長而降低(P<0.05)。 第二部分染料木黃酮對高同型半胱氨酸環(huán)境下大隱靜脈平滑肌細胞生長的影響 目的：觀察染料木黃酮(Gen)對高同型半胱氨酸環(huán)境下GSVSMC生長的影

5、響。 方法：將細胞隨機分組：(1)空白對照組：DMEM培養(yǎng)基；(2)Hcy組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)細胞24h=(3)Hcy+Gen濃度組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)24h后，加入不同濃度的Gen(5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)培養(yǎng)24h；(4)Hcy+Gen時間組：500μmol/L的Hcy培養(yǎng)24h后，加入10mg/L的Gcn培養(yǎng)不同的時間(12h、24h、48h、72h)。用MTT法測定

6、光吸收度，計算細胞生長抑制率。采用流式細胞儀Annexin V/PI雙標記染色法分析Gen對GSVSMC凋亡率的影響。 結果：1.MTT實驗顯示，在作用時間相同的條件下，隨著Gen作用濃度的增加，GSVSMC的增殖抑制率增高；在Gen濃度相同的條件下，隨著作用時間的延長，GSVSMC的增殖抑制率增高，與對照組相比較有明顯差異，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 2.流式細胞儀結果顯示，在作用時間相同的條件下，GSVSMC的凋