實驗動物皮膚病原真菌核酸檢測方法的建立.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文實驗動物皮膚病原真菌核酸檢測方法的建立姓名：鄭龍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉福英20040301中文摘要多是選擇真菌通用引物擴(kuò)增皮膚真菌DNA的CHS基因，18S、25S和28SrRNA和rRNA的ITS區(qū)，然后對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序或使用限制性內(nèi)切酶做RFLP進(jìn)行菌種的鑒別(PCR—RFLP)，一些報道使用隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性(RAPD)對皮膚真菌直接進(jìn)行種水平的鑒別。但與醫(yī)學(xué)有關(guān)的真菌

2、種類就有百種多，皮膚真菌也有幾十種，目前尚無一種分子生物學(xué)方法能夠快速、簡便、準(zhǔn)確用于皮膚真菌種水平的鑒別。得到完整的核酸是應(yīng)用PCR方法的前提，因真菌細(xì)胞壁堅固性，通常的提取方法得不到真菌DNA。目前已有多種真菌DNA提取方法的報道，如使用破壁酶Novobiocin、玻璃珠法、使用研缽研磨等，這些方法或所用材料較昂貴，或?qū)Φ玫降腄NA的質(zhì)量有影響；同時常規(guī)的DNA抽提過程步驟繁瑣、耗時，常使工作人員疲勞厭煩。本試驗?zāi)康氖窃O(shè)計一種快速簡

3、便的提取皮膚病原真菌DNA的方法及建立一種快速、敏感和特異的核酸鑒定方法來檢測實驗動物皮膚病原真菌。方法：取標(biāo)準(zhǔn)菌株須毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犬小孢子菌傳種至沙氏斜面固體培養(yǎng)基，27℃培養(yǎng)7天。無菌取少量須毛癬菌、石膏樣小孢子菌接種于沙氏液體培養(yǎng)基，置27℃恒溫?fù)u床80轉(zhuǎn)／min振蕩培養(yǎng)lO天。將培養(yǎng)基倒入100ml離心管內(nèi)，離心沉淀裝入15mlEp管中，70。C或液氮保存。取液氮保存的須毛癬菌、石膏樣小孢子菌少量菌絲(約10rag)或