粒細胞集落刺激因子(g-CSF)對膿毒癥小鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的:
　　觀察粒細胞集落刺激因子(G-CSF)治療后膿毒癥小鼠中性粒細胞表面抗原CD64表達率、血清TNF-α、IL-10濃度及小鼠1周生存率的變化，探索G-CSF對膿毒癥小鼠免疫功能的影響，為G-CSF治療膿毒癥的研究提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1、實驗動物:10-12周齡（體重18-25克）健康的雄性昆明小鼠140只。
　　2、動物模型:采用腹腔內(nèi)注射LPS的方法建立膿毒癥小鼠模型。
　　3、實驗

2、分組及處理:將小鼠隨機分為四組，每組共35只:A組（健康對照組）腹腔內(nèi)一次性注射與B組同等劑量的生理鹽水;B組（膿毒癥模型組）腹腔內(nèi)一次性注射10mg/kg劑量的LPS;C組（空白治療組）于腹腔注射LPS后6h、30h皮下注射與D組同等劑量的生理鹽水;D組（G-CSF治療組）于腹腔注射LPS后6h、30h皮下注射50ug/kg劑量的重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)。每組隨機抽取10只，觀察各組小鼠的一般情況及1周生存率，并繪制

3、生存率曲線;每組的其余25只，于建模后12h、24h、36h、48h、60h時間點各取5只小鼠，采集外周血用于檢測。
　　4、實驗方法:采用流式細胞技術(shù)(FCM)檢測小鼠外周血中性粒細胞表面抗原CD64的表達率(％);采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測小鼠血清TNF-α及IL-10的濃度(pg/ml)。
　　5、統(tǒng)計學方法:采用Excel2003和SPSS18.0統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù)，進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:

4、r>　　1、小鼠注射LPS后均出現(xiàn)了明顯的中毒癥狀，G-CSF治療組小鼠較膿毒癥模型組及空白治療組小鼠癥狀恢復更快。膿毒癥模型組及空白治療組小鼠1周生存率均為50％，G-CSF治療組小鼠1周生存率為60％，G-CSF治療組小鼠生存率較膿毒癥模型組及空白治療組略有增加，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2、健康對照組小鼠各時間點中性粒細胞表面抗原CD64僅少量表達。膿毒癥組小鼠在LPS注射后12h中性粒細胞表面抗原CD64表達

5、率即達到峰值(45.51±3.32)％，相比于健康對照組（2.69±1.00％）顯著升高(P＜0.05)。24h時下降至（24.07±3.51％），36h、48h、60h時中性粒細胞表面抗原CD64呈低水平表達，但仍顯著高于健康對照組(P＜0.05)。給予G-CSF治療后，小鼠各時間點中性粒細胞表面抗原CD64均有較高的表達率，與膿毒癥模型組及空白治療組比較顯著升高(P＜0.05)。
　　3、膿毒癥模型組小鼠在LPS注射后12h血

6、清TNF-α濃度為（203.38±15.33pg/ml），相比于健康對照組顯著升高（P＜0.05），24h達到（348.77±21.12pg/ml）的峰值，48h才出現(xiàn)明顯的下降，60h仍顯著高于健康對照組(P＜0.05)。給予G-CSF治療后，各時間點TNF-α濃度較膿毒癥模型組及空白治療組顯著下降(P＜0.05)。
　　4、膿毒癥組小鼠在LPS注射后12h血清IL-10濃度為（54.35±7.32pg/ml），相比于健康對照顯

7、著升高(P＜0.05)，36h時達到（143.04±13.08pg/ml）的峰值，然后逐漸下降，60h仍顯著高于健康對照組(P＜0.05)。給予G-CSF治療后，其24h、36h、48h時間點IL-10濃度分別為:160.35±12.41pg/ml、177.74±13.75pg/ml、126.09±9.77pg/ml，較膿毒癥模型組及空白治療組顯著升高(P＜0.05)，12h、60h時間點IL-10濃度較膿毒癥模型組及空白治療組略有升高

8、，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、中性粒細胞表面抗原CD64在健康小鼠中僅少量表達，給予LPS后中性粒細胞表面抗原CD64表達率呈一過性增高，提示中性粒細胞表面抗原CD64表達增加可作為中性粒細胞活化的標志。
　　2、膿毒癥早期血清TNF-α及IL-10均出現(xiàn)升高，提示膿毒癥同時存在促炎反應及抗炎反應過程;血清IL-10濃度的峰值出現(xiàn)較TNF-α晚，推測抗炎反應可能繼發(fā)于促炎反應。
　　3