大鼠脊肋區(qū)創(chuàng)傷后腎臟損傷的研究——外源性ADM干預及ADM、IL-4及IFN-γ的表達.pdf

1、本文通過自由落體生物撞擊儀打擊大鼠脊肋區(qū)，建立創(chuàng)傷模型。對經體表創(chuàng)傷后的大鼠應用外源性腎上腺髓質素(adrenomedullinRat1-50，ADM)進行干預，觀察腎臟組織中γ-干擾素、白介素-4及內源性腎上腺髓質素表達的變化規(guī)律，研究外源性腎上腺髓質素對腎臟機械性創(chuàng)傷的保護作用，探討創(chuàng)傷后機體免疫系統(tǒng)的調節(jié)機制。 方法：大鼠輕度腹腔麻醉后，放置載鼠平臺上，利用自行研制的生物撞擊儀，從45cm高度以自由落體方式直接打擊大鼠脊肋

2、區(qū)制作腎臟創(chuàng)傷模型。實驗動物分為四個大組，正常對照組D(8只)、創(chuàng)傷組C(C1、C2、C3、C4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時各處死8只)、創(chuàng)傷前給藥組A(A1、A2、A3、A4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時各處死8只)、創(chuàng)傷后給藥組B(B1、B2、B3、B4共32只，分別在打擊后1、6、12、24小時各處死8只)。實驗動物采用快速心臟采血法處死。迅速解剖動物提取下丘腦、垂體、腎上腺和腎臟標本，10％甲醛固定

3、。HE染色觀察創(chuàng)傷后組織的基本病理改變。免疫組化染色觀察γ-干擾素、白介素-4及腎上腺髓質素在組織中的表達，通過比較，觀察陽性表達指標在各組之間的差異以及隨時間變化的規(guī)律性。 結果：腎臟創(chuàng)傷后同一時相內，各組間腎臟組織ADM的表達強度具有由A區(qū)至D區(qū)逐漸減弱的區(qū)域性特點。各組內比較又具有時序性特點，A組在創(chuàng)傷后1h出現(xiàn)陽性表達，6h陽性表達強度降低，12h陽性表達強度上升，24小時升高并達高峰；B組在腎臟創(chuàng)傷后1h為陽性表達最強

4、，6h陽性表達強度降低，12h繼續(xù)降低，24小時陽性表達強度輕度上升；C組在腎臟創(chuàng)傷后1h為陽性表達較強，6h陽性表達強度降低，12h繼續(xù)降低，24小時顯著增強并達高峰；D組呈陽性表達。同一時段各組間ADM的表達：創(chuàng)傷后1h，B組ADM陽性表達最強，A組次之，C組最弱。創(chuàng)傷后6h，A組與B組ADM陽性表達最強，C組與D組陽性表達弱；創(chuàng)傷后12h，A組ADM陽性表達最強，C組最弱，B、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組ADM陽性表達仍為最強。

5、整體各組間ADM的陽性表達A組最強，B組次之，D組居中，C組最弱。 下丘腦ADM的陽性表達多數位于神經纖維中，少數神經細胞核內可見棕黃色顆粒。各組內比較具有時序性特點：A組創(chuàng)傷后，1h為陽性表達，6h陽性表達增強，至12h陽性表達降至低谷，24h明顯回升；B組創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)強陽性表達，在6h、12h、24h陽性表達呈逐漸下降趨勢；C組創(chuàng)傷后1h出現(xiàn)陽性表達，6h降至谷底，12h回升，24h再次下降；D組呈陽性表達。同一時段各組

6、間ADM的表達：創(chuàng)傷后1h，B組ADM陽性表達最強，A組、C組次之，D組最弱；創(chuàng)傷后6h，A組ADM陽性表達最強，B組次之，C組陽性表達最弱；創(chuàng)傷后12h，C組ADM陽性表達最強，A組最弱，B、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組ADM陽性表達最強。整體各組間ADM的陽性表達B組最強，A組次之，C組與D組最弱。 IL-4的陽性表達：A組腎臟創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)陽性表達，6h、12h陽性表達強度逐漸上升，24小時升高并達高峰；B組創(chuàng)傷后，1

7、h為陽性表達，6h陽性表達強度增高并達高峰，12h出現(xiàn)回落，24h繼續(xù)下降；C組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽性表達，6h陽性表達強度略升高，12h降至谷底，24小時出現(xiàn)回升；D組呈陰性表達。同一時段各組間IL-4的表達：創(chuàng)傷后1h，B組IL-4陽性表達最強，A組次之，C組較弱；創(chuàng)傷后6h，B組IL-4陽性表達最強，A組次之，C組較弱；創(chuàng)傷后12h，A組IL-4陽性表達最強，B組次之，C、D兩組為陰性表達；創(chuàng)傷后24h，A組IL-4陽性表達仍為最

8、強，B組次之，C組較弱。整體各組間IL-4的陽性表達A組與B組最強，C組次之，D組最弱為陰性表達。 IFN-γ的陽性表達結果：A組腎臟創(chuàng)傷后，1h出現(xiàn)陽性表達，6h陽性表達強度略下降，12h陽性表達強度逐漸升高，24小時升高并達高峰；B組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽性表達，6h陽性表達強度增高，12h出現(xiàn)回落，24小時升高并達高峰；C組腎臟創(chuàng)傷后，1h為陽性表達，6h陽性表達強度降低，12h陽性表達強度升高并達高峰，24小時出現(xiàn)回落；D

9、組呈陽性表達。同一時段各組間IFN-γ的表達：創(chuàng)傷后1h，B組IFN-γ陽性表達最弱；創(chuàng)傷后6h，B組IFN-γ陽性表達最弱；創(chuàng)傷后12h，C組IFN-γ陽性表達最強，B組最弱，A、D兩組居中；創(chuàng)傷后24h，A組IFN-γ陽性表達最強，C組次之，B、D兩組最弱。整體各組間IFN-γ的陽性表達C組最強，A組次之，B組與D組最弱。 結論：腎組織ADM的表達強度與創(chuàng)傷后組織缺血缺氧的嚴重程度有密切關系；腎臟損傷給予外源性ADM干預，對

10、腎組織具有明顯的保護作用，其作用強弱與給藥時間有密切關系；外源性ADM在腎損傷的過程中，除對腎損傷起保護作用外，還可使下丘腦內ADM表達增強，預防機體急性創(chuàng)傷后引起的缺血再灌注，對腦部亦發(fā)揮保護作用；腎臟ADM與下丘腦ADM的陽性表達存在正相關關系，提示下丘腦ADM對腎臟ADM表達有一定的上調作用；腎臟創(chuàng)傷早期各個時相的IL-4與IFN-γ表達呈現(xiàn)負相關關系，提示IL-4與IFN-γ在腎損傷與修復中依然發(fā)揮拮抗作用；創(chuàng)傷前預防性給予外源