利用激光顯微切割聯(lián)合質譜蛋白質組學技術鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型.pdf

1、背景和目的：
　　系統(tǒng)性淀粉樣變性是一組由于含有反向平行β折疊片結構的蛋自在細胞外組織中沉積，進而造成心臟、肝臟、腎臟、骨髓、外周神經等器官功能不全的異質性疾病。目前普遍采用依據致病蛋白種類對淀粉樣變性進行分型的原則，各類亞型的預后及治療方案都不盡相同。但是，臨床廣泛應用的分型方法如免疫熒光和免疫組化法存在商品化抗體數量有限或抗體結合表位喪失等問題，檢測的敏感性和特異性均較低。國外已有少數研究顯示，質譜蛋白質組學方法可成功應用于淀

2、粉樣變性的分型。激光顯微切割聯(lián)合質譜蛋白質組學(LMD/MS)技術不僅能夠實現快速準確的分型，同時可全面反映病變部位的蛋白構成，有利于深入發(fā)病機制研究。
　　本研究的主要目包括:
　　(1)建立利用LMD/MS技術鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型的方法;
　　(2)利用LMD/MS方法對我院近13年的系統(tǒng)性淀粉樣變性病例進行亞型診斷。
　　方法：
　　實驗標本來自于2000年1月至2013年3月北京協(xié)和醫(yī)院病理確診

3、的系統(tǒng)性淀粉樣變性病例。通過北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會審查后，收集患者病變部位的福爾馬林固定石蠟包埋病理標本。對已采集的標本進行切片、脫蠟、染色處理，利用激光顯微切割系統(tǒng)獲取剛果紅染色陽性的淀粉樣變性病變區(qū)域，之后完成蛋白提取、酶切、多肽萃取、質譜檢測、數據庫搜索和數據分析，明確病變區(qū)域的具體蛋白構成，進而確定淀粉樣變性亞型。
　　結果：
　　本研究的72例淀粉樣變性病例中有65例通過LMD/MS方法獲得了明確的診斷結果，分型成

4、功率為90.3％。7例病例因顯微切割失敗導致分型失敗。1例病例經LMD/MS檢測排除了淀粉樣變性診斷。陽性對照組中的16例病例的LMD/MS分型結果亞型符合率為100％。64例成功分型的病例包括AL-κ型24例(37.5％)，AL-λ型33例(51.6％)，ATTR型4例(6.2％)，AA型2例(3.1％)和AH型1例(1.6％)。本研究中有8例患者接受過免疫組化法分型，其中只有3例有明確診斷結果，與LMD/MS分型結果相比較，僅1例的

5、亞型診斷正確。因此，免疫組化法的分型準確性僅為12.5％。31例存在單克隆免疫球蛋白血癥的病例經LMD/MS檢測均屬于AL型淀粉樣變性，未發(fā)現其他亞型合并單克隆免疫球蛋白血癥。有2例病例的血清免疫固定電泳結果為陰性，但血清游離輕鏈檢測提示存在單克隆輕鏈，且輕鏈類型與LMD/MS分型結果相符。
　　結論：
　　利用LMD/MS技術鑒定系統(tǒng)性淀粉樣變性亞型的敏感性及特異性均較高，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)免疫學檢測手段。該方法可作為系統(tǒng)性淀粉