膠質(zhì)瘤miR-29s表達異常減少對其DNMT3A-3B的影響及其機制研究.pdf

1、分類號：R 7 3 9 ．4密 級：學位類別：科學學位團 專業(yè)學位口O學校代碼：1 0 0 6 2學 號：2 0 1 1 6 0 2 3 5 7學科門類：醫(yī)學又蚌魯科袁孳 T I A N J I N M E O l ‘跚瞳U —n 限黔1 1 愕碩士學位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目：膠質(zhì)瘤m i R ．2 9 s 表達異常減少對其D N M T 3 A ／3 B 的影響及其機制

2、研究T IT L E S t u d yo f t h eE f f e c t so fm i R ．- 2 9 sD o w n ．．E x p r e s s i o n o n D N M T 3 A ／3 B a n d t h eM e c h a n i s m s i nG l i o m a s一級學科： 臨床醫(yī)學二級學科：神經(jīng)病學論文作者： 孫靜指導教師： 于士柱教授導師組成員： 王虔副研究員孫翠云助理研究員天津醫(yī)科

3、大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要【目的】m i R ．2 9 包括m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 和m i R - 2 9 c 三個亞型。近來的研究表明，這三種微小R N A ( r n i R N A ) 均是抑瘤m i R N A ( T S ．r n i R N A ) ，其低表達是一些顱外惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要因素。而膠質(zhì)瘤細胞有無m i R - 2 9 a 、m i R -

4、 2 9 b 、m i R - 2 9 c 表達異常減少，它們表達異常減少與膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的關系怎樣，均尚不清楚。在哺乳動物細胞中，D N A 甲基轉(zhuǎn)移酶3 A ／3 B ( D N M T 3 A 、D N M T 3 B ) 是重要的D N A 甲基轉(zhuǎn)移酶，可通過催化D N A 特定區(qū)段從頭甲基化參與表觀遺傳學調(diào)控，其過表達可引起重要抑瘤基因啟動子區(qū)甲基化，由此引起的抑瘤基因表達下調(diào)可導致腫瘤發(fā)生。有線索顯示，在顱外惡性腫瘤細胞中

5、m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 、m i R - 2 9 c 均可特異性敲低D N M T 3 A 和D N M T 3 B 的表達；但二者在膠質(zhì)瘤細胞中的調(diào)控關系如何，以及m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 、m i R - 2 9 c 低表達或缺失對膠質(zhì)瘤細胞D N M T 3 A 和D N M T 3 B 表達有無影響，尚有待進一步探討。我們以人膠質(zhì)瘤組織標本和人非腫瘤對照腦組織標本

6、及U 8 7 M G 和U 2 5 1膠質(zhì)母細胞瘤細胞系為研究對象，通過檢測分析m i R - 2 9 各亞型在不同級別膠質(zhì)瘤組織中的表達變化及變化趨勢，明確在膠質(zhì)瘤細胞中D N M T 3 A 和D N M T 3 B是否是m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 和m i R - 2 9 c 的靶基因，并確定D N M T 3 A 和D N M T 3 Br n R N A 3 ’U T R 上這三種m i R N

7、A 的靶序列，觀察和探討在膠質(zhì)瘤細胞中這三種m i R N A 對D N M T 3 A 和D N M T 3 B 表達的敲低作用和作用機制，以期闡明由m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 和m i R - 2 9 c 表達異常降低引起的m i R - 2 9 a J b ／c ．D N M T 3 A ．D N M T 3 B 通路調(diào)控紊亂在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用，并為建立以該通路為核心的膠質(zhì)瘤基因干預和分子靶向

8、治療新策略提供客觀的參考依據(jù)。【方法】①采用組織微陣列及鎖定寡核苷酸原位雜交技術，觀察6 0 例不同級別組人膠質(zhì)瘤及1 0 例非腫瘤對照腦組織組的n 】i R ．2 9 a 、m i R ．2 9 b 、m i R ．2 9 c 表達水平。②以U 8 7 M G 和U 2 5 1 細胞為研究對象，通過質(zhì)脂體介導的m i R - 2 9 a 、m i R - 2 9 b 、m i R - 2 9 cM i m i c s 和無義對照序列(

9、 S c r ) 轉(zhuǎn)染，建立三種m i R - 2 9 轉(zhuǎn)染組( m i R - 2 9 a ／b ／c 轉(zhuǎn)染組) 和S c r 對照組，同時以未轉(zhuǎn)染的U 8 7 M G 及U 2 5 1 作為空白對照組( U 8 7 ／U 2 5 組) ；利用莖環(huán)引物熒光實時定量R T - P C R ( S t e m - l o o pq R T - P C R ) 檢測各組三種m i R - 2 9 各自的表達水平。③采用生物信息學分析預測D

10、N M T 3 A 和D N M T 3 B 是否是三種m i R - 2 9 的靶基因，確定其m R N A3 ’U T R 含有的m i R - 2 9 a ／b ／c 靶序列，并用熒光素酶實驗予以證實。④用q R T - P C R 和W e s t e r nb l o t 方法檢測各組D N M T 3 A 和D N M T 3 Bm R N A 和蛋白的表達水平，觀察在膠質(zhì)瘤細胞三種m i R - 2 9 的M i m i