熒光增白劑和增效蛋白對三種鱗翅目害蟲核型多角體病毒的增效作用.pdf

1、圍食膜(PM)是位于昆蟲中腸細胞和腸腔之間的一層半透膜，起著保護中腸上皮細胞，抵抗微生物入侵的作用，是昆蟲中腸細胞和腸腔之間的一種防御性屏障。目前，用于害蟲生物防治的昆蟲病毒主要有桿狀病毒科的核型多角體病毒(NPV)和顆粒體病毒(GV)，其中大部分是針對鱗翅目害蟲的，但由于桿狀病毒殺蟲速度慢，殺蟲譜窄，而限制了推廣使用。熒光增白劑和昆蟲病毒增效蛋白能夠與圍食膜上特異位點結(jié)合，破壞圍食膜結(jié)構(gòu)，促進病原微生物對害蟲的感染。 本文從圍

2、食膜的角度入手，初步研究了兩種增效因子:熒光增白劑FB28和棉鈴蟲顆粒體病毒增效蛋白En-Ha對三種鱗翅目害蟲核型多角體病毒的增效作用。 1.FB28和En-Ha離體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，SDS-PAGE分析其圍食膜蛋白條帶的變化，發(fā)現(xiàn)FB28能夠解離大部分圍食膜蛋白至上清中，并隨時間的延長解離的量逐漸變大；En-Ha能夠發(fā)揮其金屬蛋白酶活性，降解圍食膜蛋白，在有金屬蛋白酶抑制劑EDTA的存在下，圍食膜蛋白沒有被降解，同空

3、白對照組保持一致。 2.FB28和En-Ha活體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，觀察其形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)喂食含5μl 1％FB28的飼料2h后圍食膜呈藍色熒光，開始破裂，重新食入新鮮飼料后，圍食膜又逐漸恢復(fù)完整；喂食含5μl 9μg/mL，En-Ha的飼料后，6-7h后圍食膜破裂，重新食入新鮮飼料后，圍食膜亦能恢復(fù)完整。兩種增效因子對圍食膜的破壞作用是短暫的、可恢復(fù)的。 3.FB28和En-Ha活體處理三種鱗翅目害蟲的圍食膜，

4、SDS-PAGE進一步分析其圍食膜蛋白條帶的變化，發(fā)現(xiàn)隨著圍食膜的破裂，相應(yīng)條帶的圍食膜蛋白消失，重新食入新鮮飼料后，圍食膜又逐漸恢復(fù)完整，圍食膜蛋白也逐漸恢復(fù)正常。 4.生物測定FB28和En-Ha對HaNPV、PuNPV、SeNPV的增效作用，兩種增效因子能夠通過破壞圍食膜的完整性，顯著降低三種NPV的LC50。 5.生物測定FB28和En-Ha的對圍食膜的短暫影響作用，結(jié)果表明，在新鮮飼料上恢復(fù)4h后的死亡率明顯低