穿心蓮內酯類化合物的體外UGT代謝的研究.pdf

1、目的:研究穿心蓮中主要成分穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯、去氧穿心蓮內酯的體外葡萄糖醛酸化代謝，闡明其代謝結合位點、參與其代謝的主要尿苷二磷酸葡萄糖醛酸化轉移酶(UGTs)單酶亞型、不同種屬對穿心蓮內酯類化合物的葡萄糖醛酸化代謝的種屬差異、代謝產物的藥理活性以及三種主要成分之間聯(lián)合用藥時可能存在的藥物藥物相互作用(DDI)。
　　方法:(1)體外代謝實驗:采用不同種屬混合肝微粒體和12種UGT重組單酶體外孵育的方法，對穿心蓮內酯類化合

2、物的葡萄糖醛酸化代謝進行研究，包括代謝酶的歸屬、不同種屬對其代謝的種屬差異以及代謝動力學的研究;(2)利用植物化學方法和波譜學方法分離鑒定穿心蓮內酯類化合物的葡萄糖醛酸化的代謝產物;(3)通過LPS刺激RAW264.7細胞后的NO抑制作用，來測定原型和代謝產物的體外抗炎活性。
　　結果:穿心蓮內酯類化合物在人肝微粒體中葡萄糖醛酸化代謝的代謝產物為19位β-D-葡萄糖醛酸化產物;UGTs單酶中UGT2B7、-1A3、-1A4、-2B

3、4參與了它們葡萄糖醛酸化，其中UGT2B7為主要參與單酶亞型;穿心蓮內酯和去氧穿心蓮內酯在人肝微粒體中表現(xiàn)為雙向代謝動力學，脫水穿心蓮內酯表現(xiàn)為經典米氏代謝動力學，穿心蓮內酯類化合物在單酶中均表現(xiàn)為米氏代謝動力學并得到了其相關動力學參數(shù)（Vmax， Km， Ki和CLint）;動物中除了大鼠對穿心蓮內酯不發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝外，穿心蓮內酯類化合物19位葡萄糖醛酸化反應在其他種屬中均有發(fā)現(xiàn)，穿心蓮內酯類化合物的3位葡萄糖醛酸化反應在豬、猴

4、中均有發(fā)生。此外，脫水穿心蓮內酯的3位葡萄糖醛酸化反應在大鼠和小鼠中也有發(fā)生;活性研究表明:穿心蓮內酯類化合物19位葡萄糖醛酸化代謝產物仍然具有一定的抗炎活性，但3位葡萄糖醛酸化產物除穿心蓮內酯3位葡萄糖醛酸化產物仍具活性外，其余3位葡萄糖醛酸化產物無抗炎活性;此外，去氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對穿心蓮內酯的葡萄糖醛酸化代謝表現(xiàn)為競爭性抑制，其Ki分別為2.5μM和12.8μM。
　　結論:本次研究中我們首次報道了穿心蓮內酯類化

5、合物在人和五種種屬微粒體中的葡萄糖醛酸化代謝，確定了其在不同種屬中的代謝產物的結構;UGT2B7是其葡萄糖醛酸化代謝中的主要參與單酶;值得注意的是人體內葡萄糖醛酸化代謝產物仍然具有一定的抗炎活性;人和不同種屬對穿心蓮內酯類化合物的葡萄糖醛酸化代謝存在較大的種屬差異，人體主要為19位點葡萄糖醛酸化產物，動物種屬中發(fā)現(xiàn)了3位葡萄糖醛酸化產物;穿心蓮內酯類化合物在聯(lián)合應用時，去氧穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對穿心蓮內酯的葡萄糖醛酸化存在一定的抑