一個常染色體顯性遺傳視網膜色素變性家系SNRNP200新突變位點定位.pdf

1、目的：
　　1.建立原發(fā)性視網膜色素變性(retinitis pigmentosa，RP)家系臨床資料紙質和電子檔案數(shù)據庫及血標本庫。
　　2.分析一個視網膜色素變性家系SC001的臨床表型和遺傳學特征，定位該家系的致病基因突變位點。
　　3.掌握高通量測序技術(next-generation sequencing，NGS)的原理和數(shù)據分析。
　　方法：
　　1.采集SC001家系臨床資料：簽署知情同意書，

2、填寫RP調查表，繪制家系圖譜。對受試者進行視力、色覺、眼壓、房角、晶狀體、眼底、視野及視網膜電圖(electroretinography，ERG)等檢查。分析家系臨床表型，確定其遺傳方式。抽取受試者外周靜脈血10ml，提取基因組DNA，經鑒定合格后放入-80℃冰箱保存。將原始紙質版資料和電子版資料整理后歸檔。
　　2.采用聚合酶連反應(polymerase chain reaction，PCR)和Sanger測序法對RHO、Per

3、ipherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS共8個常染色體顯性遺傳RP(autosomal dominant RP，adRP)候選基因的22個外顯子進行致病基因突變位點篩查。
　　3.采用外顯子測序技術(exome sequencing)對SC001家系先癥者進行外顯子捕獲測序，在結果中篩選RP已知候選基因突變位點，然后采用Sanger測序法在家系內部驗證，排除假陽性位點和SNPs。發(fā)現(xiàn)

4、陽性位點后，在家系外100個無親緣關系的正常人中驗證。
　　結果：
　　1.建立了科學、規(guī)范，符合國際、國內遺傳資源采集研究原則要求的SC001RP遺傳家系臨床資料紙質和電子檔案數(shù)據庫及血標本庫。
　　2.SC001家系成員在RHO、Peripherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS基因的外顯子編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)致病突變，但在Peripherin/RDS基因外顯子編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)5處單核

5、苷酸改變。
　　3.adRP候選基因SNRNP200外顯子20一新的錯義突變c.2653C>G，p.Q885E與SC001家系表型共分離，并且在100個無親緣關系的正常人中不存在該突變位點。USH2A基因c.2750G>A和PDE6B基因c.1415G>A為單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphisms，SNPs)，USH2A基因c.10246T>G和c.997T>C為假陽性位點。
　　結論：<

6、br>　　1.RP遺傳家系臨床資料紙質和電子檔案數(shù)據庫及血標本庫是研究視網膜色素變性疾病的基礎，保證了遺傳資源資料的規(guī)范性、完整性弄口延續(xù)性，為今后視網膜色素變性家系的陸續(xù)收集和研究提供了很好的流程和模式，為后續(xù)深入研究和流行病學調查奠定了基礎。
　　2.SC001家系為adRP家系，候選基因RHO、Peripherin/RDS、ROM1、NRL、CRX、FSCN2、GUCA1B和TOPORS基因不是該家系的致病基因，Periph