抗磷脂抗體對Th細胞亞型影響的研究.pdf

1、本研究分為三部分。
　　第一部分 不同濃度抗磷脂抗體對外周血單個核細胞中Th細胞亞型表達的調節(jié)
　　目的:探討不同濃度aPL抗體對外周血中Th1、Th2、Th17、Treg細胞調節(jié)作用。
　　方法:分離健康人外周血單個核細胞，與不同濃度的抗磷脂抗體共同培養(yǎng)孵育48小時后，檢測外周血單個核細胞中Th1、Th2、Th17、Treg四種亞型的表達。我們采用流式細胞檢測技術直接從數量上檢測抗磷脂抗體干預后的Th1、Th2、Th

2、17、Treg四種亞型細胞分化情況，并通過實時定量PCR檢測轉錄因子的表達，從Th細胞分化的上游過程中探討抗磷脂抗體干預后的Th1、Th2、Th17、Treg四種亞型細胞分化狀態(tài)。
　　結果:本研究發(fā)現(xiàn)aPL干預后Th1細胞及其T-bet mRNA表達均出現(xiàn)下調;Th2細胞及其GATA3 mRNA表達上調，Th1/Th2比值下降，平衡向Th2偏移;Th17細胞及其ROR-γ t mRNA表達上調，Treg細胞及其Foxp3mRNA

3、表達下調，Th17/Treg失衡。且本實驗發(fā)現(xiàn)Th細胞亞型變化與aPL抗體濃度相關，高濃度的aPL抗體導致Th細胞亞型分化的紊亂。
　　結論:
　　1.aPL導致PBMCs中Th1、Th2、 Th17、Treg細胞表達發(fā)生改變，導致Th1/Th2失衡，Th17/Treg失衡，導致免疫紊亂，可能參與aPL介導的組織損傷。
　　2.Th細胞亞型變化與aPL濃度存在劑量關系。
　　第二部分 探討抗磷脂抗體對外周血單個核

4、細胞表達協(xié)同刺激分子PD-L1的影響
　　目的:探討不同濃度抗磷脂抗體對協(xié)同刺激分子PD-L1表達的調節(jié)作用以及PD-L1在aPL導致Th細胞亞型分化紊亂中的作用。
　　方法:分離健康人外周血單個核細胞，與不同濃度的抗磷脂抗體共同培養(yǎng)孵育48小時后，檢測采用流式細胞技術檢測外周血單個核細胞中PD-L1蛋白表達強度，并通過實時定量PCR檢測PD-L1 mRNA轉錄因子的表達。同時分析PD-L1表達與Th細胞分化的相關情況。觀察

5、并比較經PD-L1-Ig預處理后，致病濃度的aPL抗體對Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細胞分化的影響。
　　結果:本研究發(fā)現(xiàn)aPL干預后PD-L1蛋白及mRNA表達均呈上調趨勢，各組間表達有統(tǒng)計學差異(F=9.391，p=0.000;F=15.344，p=0.000)，且上調與抗體濃度顯著正相關(r=0.713，p=0.000;r=0.756，p=0.000)。PD-L1蛋白表達與Th1細胞，Treg細胞以及Th1

6、/Th2比例負相關，而與Th2細胞及Th17細胞表達無相關性。而PD-L1 mRNA表達與T-bet mRNA，F(xiàn)oxp3 mRNA以及T-bet/ GATA3比例顯著負相關，與GATA3 mRNA及ROR-γ t mRNA表達顯著正相關。但是給予PD-L1-Ig阻斷協(xié)同刺激信號通路后，研究發(fā)現(xiàn)高濃度的aPL組與阻斷抗體組Th細胞亞型變化無顯著差異(p＞0.05)。
　　結論:
　　1.aPL可導致PD-L1表達上調，且與抗

7、體濃度正相關。協(xié)同刺激分子PD-L1可能在APS發(fā)病中發(fā)揮作用。
　　2.協(xié)同刺激分子PD-L1可能在aPL導致的Th細胞分化紊亂中發(fā)揮作用。
　　3.抑制PD-L1協(xié)同刺激信號通路對Th亞型分化無明顯影響。
　　第三部分卡 介菌多糖核酸對aPL干預后的PBMCs中Ih細胞亞型的影響
　　目的:探討卡介菌多糖核酸治療APS的可能機制
　　方法:分離健康人外周血單個核細胞，與致病濃度的抗磷脂抗體、治療濃度的卡

8、介菌多糖核酸溶液共同培養(yǎng)孵育48小時后，采用流式細胞技術檢測外周血單個核細胞中Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細胞表達情況，并通過實時定量PCR檢測Th1、Th2、Th17、Treg四種Th亞型細胞mRNA表達的變化情況。
　　結果:本研究發(fā)現(xiàn)卡介菌多糖核酸溶液干預后Th1細胞及其T-bet mRNA表達均出現(xiàn)顯著上調(p=0.000; p=0.000);Th2細胞及其GATA3 mRNA表達變化無統(tǒng)計學差異(p＞0