DHA對卵巢癌耐紫杉醇細胞A2780-T耐藥性的影響及其機制研究.pdf

1、目的:探討二十二碳六烯酸(DHA)對人卵巢癌耐紫杉醇細胞株A2780/T對紫杉醇耐藥性的影響，并進一步研究DHA逆轉耐藥的機制。
　　方法:1、CCK-8方法檢測不同濃度DHA(0-512μmol/L)對人卵巢癌敏感細胞株A2780增殖的影響，篩選出最適作用濃度。2、CCK-8方法檢測不同濃度DHA（0-1000μmol/L）對人卵巢癌耐藥細胞株A2780/T增殖的影響，篩選出最適作用濃度。3、用特定濃度DHA(64μmol/L及

2、296μmol/L)分別處理A2780及A2780/T, CCK-8方法檢測預處理后人卵巢癌耐藥細胞株A2780/T及A2780對紫杉醇耐藥性的影響4、用羅丹明試驗檢測不同濃度DHA（0μmol/L，11μmol/L，33μmol/L，100μmol/L，296μmol/L）聯(lián)合紫杉醇(3μmol/L)作用后，A2780/T細胞對于藥物外排能力的變化。5、利用流式細胞儀檢測測不同濃度DHA（0μmol/L，11μmol/L，33μmol

3、/L，100μmol/L，296μmol/L）聯(lián)合紫杉醇(3μmol/L)作用后，細胞周期的分布改變。6、RT-PCR方法檢測DHA作用于A2780/T細胞后MDR1 mRNA表達的變化7、Western blot檢測DHA作用于A2780/T細胞后P-gp、MDR相關蛋白（MDR1，MRP, BCRP和LRP）及p38MAPK、NF-κB相關通路蛋白表達的變化。
　　結果:1、CCK-8法檢測結果顯示當DHA濃度低于64μmol

4、/L DHA對于A2780細胞毒作用可以忽略不計，選取64μmol/L作為接下來A2780的DHA作用濃度。2、CCK-8法檢測結果顯示當DHA濃度低于296μmol/L DHA對于A2780/T細胞毒作用可以忽略不計，選取296μmol/L作為接下來A2780/T的DHA作用濃度。3、用特定濃度DHA(64μmol/L及296μmol/L)分別處理A2780及A2780/T后，CCK-8結果顯示A2780/T對于紫杉醇的IC50下降，

5、差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)，而A2780對于紫杉醇的IC50未見明顯變化。4.羅丹明實驗顯示DHA預處理后，羅丹明在A2780/T細胞內(nèi)的含量增加，且呈劑量依賴性(p＜0.05)。5、流式細胞儀結果顯示A2780/T細胞中處于靜止期(G0/G1)的細胞百分比增加(p＜0.05)。6、RT-PCR方法檢測結果顯示DHA可以降低A2780/T細胞MDR1mRNA表達水平。7、Western blot方法檢測結果顯示DHA預處理后，A2