番茄漸滲系IL11-3分子標記的精細定位及其抗病相關基因的克隆.pdf

1、番茄的野生種含有很多抗病性相關的基因，在番茄的育種中廣泛應用。其中，Lycopersicon.pennellii是一種生長在炎熱干旱環(huán)境下的綠果番茄，對多種病蟲害表現(xiàn)抗性。1994年，Y.Eshed和D.Zamir以野生番茄L.pennellii為供體親本，栽培番茄Lycopersiconesculentum.cv.M82為受體親本，利用了1030多個RFLP分子標記，建立了完整的野生番茄L.pennellii的漸滲系。
　　

2、本研究利用L.pennellii(LA716)漸滲系中與番茄笫Ⅺ號染色體相關的四個株系IL11-1，2，3，4，分別和栽培番茄M82雜交獲得其F2代分離群體，采用分子標記和基因共線性關系的方法，篩選出四個F2代群體中的共482株重組單株，利用擬南芥已知的COSⅡ標記定位番茄第Ⅺ號染色體上的IL11-3區(qū)段分子標記，獲得了番茄第Ⅺ號染色體IL11-3區(qū)段精細標記的遺傳圖譜，并且在41個標記中找到并克隆了三個與番茄抗病性相關的基因。結果如下

3、:
　　 1、以野生番茄L.pennellii的漸滲系IL11-3株系為母本、M82為父本建立的F2代中，隨機挑選出480個單株，利用定位各漸滲系染色體片段兩端的分子標記COSIIMarkerC2_At2g14260、Hba78A16T7，篩選出發(fā)生交換的重組單株80個，計算出遺傳距離。并且用已知的番茄IL11-3上的18個CAPS分子標記，在80個F2代重組單株中，進行PCR及酶切驗證，建立了野生番茄L.pennellii的漸

4、滲系IL11-3的分子標記的精細遺傳圖譜。這18個CAPS分子標記分別是C2_At4g10050、C2_At5g04590、TG400、C2_At3g44880、C2_At4g01560、C2_At3g44890、C2_At2g27730、C2_At3g52730、C2_At2g27290、C2_Atlg30825、C2_AGg54470、C2_At5g20890、cLEC-24-C3、C2_At5g60600、C2_At4g32930

5、、T0302、BAC_119J05、C2_At5g25760。加上兩端標記的這20個標記被定位在11.1cM之內，由此建立了漸滲系IL11-3區(qū)段精細標記的遺傳圖譜，該遺傳圖譜與康奈爾大學茄科作物網(wǎng)站www.sgn.cornell.edu公布的遺傳距離不同。
　　 2、分析番茄第Ⅺ號染色體上的41個CAPS標記，經(jīng)過同源序列在GeneBank和EST庫的比對，找到了7個與抗病相關的序列，克隆了三個與番茄抗病性相關的基因。

6、　　 1)標記COSIIMarkerC2_At2g27450有與已知的公布序列AC217004、野生草莓（Fragariavesca）中一個抗鹽抗熱的cDNA序列(EX682439)以及番茄p-丙氨酸合成酶基因(Y19104)相同的QDXGL-GANXV氨基酸保守序列;克隆的這段基因序列長度為568bp，該序列與公布序列AC217004有98％的同源性，與野生草莓(Fvesca)中一個抗鹽抗熱的cDNA序列(EX682439)以及番茄

7、β-丙氨酸合成酶基因(Y19104)有46％的同源性。標記COSIIMarkerC2_At2g27450的克隆序列及其AC217004均含有198bp的插入片段。
　　 2)標記COSⅡMarkerC2_At3g44880的擴增序列與番茄Solanum.lycopersicum葉片壞死斑點相關的一個基因(AF321984)共有序列之間有99％的同源性。該擴增片斷的基因全長為1800bp，其中352bp為擴增序列，但是，包含有94