兩步快速純化雞產蛋下降綜合癥病毒方法的研究及標準抗原、標準血清的制備.pdf

1、雞產蛋下降綜合癥（Egg Drop Syndrome-76，簡稱EDS-76）是由腺病毒感染引起種雞和蛋雞產蛋量急劇下降，同時伴有無殼蛋、薄殼蛋、軟殼蛋、畸形蛋的一種病毒性疾病。該病是世界范圍內導致雞產蛋率下降的重要原因之一。本研究在蔗糖密度梯度離心的基礎上建立了一種快速純化EDSV的新方法，制備了一批EDS-76抗雞血清，以此為生物學材料，進一步標定EDS-76的抗原和抗血清，獲得了標準抗原和標準陽性血清，為EDSV的診斷和防治提供了

2、有效的方法和材料。
　　1.雞產蛋下降綜合癥病毒純化方法的研究
　　本研究將傳統(tǒng)的蔗糖密度梯度離心與兩步法快速純化方法進行了比對分析。電鏡比對結果顯示:新建立的兩步法快速純化方法可以得到大量形態(tài)大小一致的球形病毒粒子，直徑70～80nm，符合腺病毒粒子的典型特征;而傳統(tǒng)純化方法得到的病毒粒子則數(shù)量稀少，殼粒邊緣有缺損，形態(tài)模糊。血凝性試驗比對結果顯示:傳統(tǒng)方法得到的病毒HA效價為216，而新建立的兩步法快速純化方法得到的病毒

3、HA效價為219，血凝效價較高。PCR鑒定結果顯示:用引物Ⅰ、Ⅱ分別進行PCR擴增，發(fā)現(xiàn)兩種純化方法得到的病毒均可擴增出大小為918bp及2733bp的兩條特異性條帶。綜合分析提示:新建立的兩步法純化方法比起傳統(tǒng)方法更加省時省力，且病毒純化效果更加顯著，這為后期標準抗原的制備奠定了基礎。
　　2.雞產蛋下降綜合癥標準抗原的制備
　　將純化的病毒抗原進行了PCR純異性分析、Western-blot反應譜分析、瓊擴試驗分析以及病

4、毒滅活條件測定。結果表明本研究純化的病毒無CAV、REV、ALV、MDV、IBV、GPV、IBDV、ILTV等外源性病毒，無菌檢驗、支原體檢驗合格，具有很高的純粹性，且該病毒與經典AV-127種毒具有相同的Western-blot反應譜，同時該病毒還可以用于瓊擴試驗診斷。用甲醛和β-丙內酯分別滅活該純化病毒，制備標準抗原，并進行比較，最后確定滅活條件為0.5％β-丙內酯作用60h。
　　將純化的病毒用PBS緩沖液稀釋至效價為214

5、，按上述滅活條件對病毒進行滅活，加入1％BSA保護劑，分裝，凍干。對抗原的質量進行驗證，同時檢查物理性狀、均一性、穩(wěn)定性、保質期等進行鑒定，最后獲得了高質量的標準抗原。
　　3.雞產蛋下降綜合癥標準血清的制備
　　采取自然感染的途徑對SPF雞進行攻毒，6免之后制得效價為215的抗雞血清。在EDSV感染的CEF上進行IFA效價檢測，血清的IFA效價達1∶1000。特異性鑒定發(fā)現(xiàn)該血清不與NDV、AIV、ALV-J、ALV-A、