骨髓來源抑制細(xì)胞在自身免疫性肝病中的作用.pdf

1、背景：骨髓來源抑制細(xì)胞（MDSCs）由骨髓祖細(xì)胞和未成熟骨髓細(xì)胞組成。在病理情況下如自身免疫性疾病情況下，未成熟骨髓細(xì)胞分化為成熟細(xì)胞的過程被部分阻斷，從而導(dǎo)致MDSCs的積聚和擴(kuò)增。MDSCs表達(dá)高水平的精氨酸酶1和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶，并通過多種機(jī)制發(fā)揮抑制T細(xì)胞的功能。MDSCs在腫瘤、慢性炎癥及免疫相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，然而，尚缺乏MDSCs在自身免疫性肝病（AILD）發(fā)病機(jī)制中作用的研究。
　　第一部分法尼酯

2、 X受體通過調(diào)控骨髓來源抑制細(xì)胞緩解免疫介導(dǎo)肝損傷
　　目的：研究法尼酯 X受體（FXR）在免疫介導(dǎo)肝損傷動(dòng)物模型中的作用，以及對(duì)免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞 MDSCs的調(diào)控及機(jī)制。
　　方法：分別建立兩種自身免疫性肝炎動(dòng)物（α-GalCer組或Con A組）模型，并同時(shí)設(shè)立FXR激動(dòng)劑-GW4064治療組（GW4064+GalCer組或GW4064+Con A組）、正常對(duì)照組和GW4064對(duì)照組，通過HE染色觀察肝臟病理組織學(xué)變化，測(cè)定

3、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平來檢測(cè)肝臟細(xì)胞損傷情況變化，利用流式細(xì)胞術(shù)分析肝內(nèi)MDSCs表型和功能變化。使用流式細(xì)胞術(shù)分選肝臟、脾臟內(nèi)單核和粒細(xì)胞型MDSCs，后通過過繼性回輸實(shí)驗(yàn)分析不同MDSCs亞群的免疫調(diào)節(jié)功能。通過PCR和免疫組化法檢測(cè) FXR對(duì)促進(jìn)MDSCs積聚和趨化因子的調(diào)控作用。最后通過熒光素酶報(bào)告基因和染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)來探討FXR對(duì)MDSCs功能相關(guān)表面受體PIR-B的調(diào)控機(jī)制。<

4、br>　　結(jié)果：在α-GalCer誘導(dǎo)和Con A誘導(dǎo)的自身免疫性肝炎模型中均出現(xiàn)肝內(nèi)CD11b+Ly6C+MDSCs擴(kuò)增，而GW4064處理組肝內(nèi)MDSCs進(jìn)一步擴(kuò)增，特別是CD11b+Ly6Chi單核型 MDSCs增高明顯。過繼性回輸實(shí)驗(yàn)證明，在AIH模型中，肝內(nèi)CD11b+Ly6Chi MDSCs的免疫抑制作用最強(qiáng)烈。GW4064可通過增加MDSCs相關(guān)趨化因子S100A8的表達(dá)而擴(kuò)增、趨化肝內(nèi)CD11b+Ly6C+MDSCs。此

5、外，GW4064可通過增加MDSCs表面的PIR-B表達(dá)而增強(qiáng)其免疫抑制功能，其調(diào)控機(jī)制主要是FXR直接與PIR-B啟動(dòng)子區(qū)FXR反應(yīng)元件相結(jié)合而促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)論：FXR可通過擴(kuò)增肝內(nèi)MDSCs數(shù)量和增強(qiáng)其免疫抑制功能而緩解免疫介導(dǎo)肝損傷，這是維持肝內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)的重要負(fù)調(diào)控機(jī)制。
　　第二部分 MDSCs在自身免疫性肝病患者外周血和肝臟組織中的數(shù)量變化及意義
　　目的：研究 MDSCs在自身免疫性肝?。ˋILD）患

6、者外周血和肝臟組織中的數(shù)量變化，并分析MDSCs數(shù)量與肝臟炎癥及纖維化程度的關(guān)系，探討MDSCs在AILD發(fā)生發(fā)展中的作用及其臨床意義。
　　方法：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)自身免疫性肝炎（AIH）患者、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）、慢性乙型肝炎（CHB）患者和健康對(duì)照（HC）外周血中MDSCs水平和分型情況。采用激光共聚焦顯微鏡觀察肝內(nèi)MDSCs的分布特點(diǎn)。免疫組化技術(shù)檢測(cè)AIH患者、PBC患者、CHB患者和健康人群肝活檢組織標(biāo)本中MD

7、SCs相關(guān)指標(biāo)CD33以及CD11b的分布情況，分析它們與肝臟炎癥、肝臟纖維化的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1. AIH患者、PBC患者、CHB患者外周血HLA-DRlow/-CD33+CD11b+MDSCs和HLA-DRlow/-CD33+CD11b+CD14+CD15-單核細(xì)胞型MDSCs數(shù)量均高于HC，且這些患者外周血MDSCs均以單核細(xì)胞型為主。2. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝內(nèi)CD33+細(xì)胞與CD11b+細(xì)胞基本重疊，

8、且AIH患者、PBC患者肝內(nèi)CD33+CD11b+MDSCs主要分布于匯管區(qū)。3. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝內(nèi)CD33+細(xì)胞數(shù)均高于HC；AIH患者或PBC患者肝內(nèi)CD33+細(xì)胞數(shù)與肝臟的炎癥活動(dòng)分級(jí)及肝纖維化分期均存在正相關(guān)性。4. AIH患者、PBC患者、CHB患者肝內(nèi)CD11b+細(xì)胞數(shù)均高于HC；AIH患者或PBC患者肝內(nèi)CD11b+細(xì)胞數(shù)與肝臟的炎癥活動(dòng)分級(jí)及肝纖維化分期均存在正相關(guān)性。
　　結(jié)論：MDSCs在