姜黃素對慢性酒精肝損傷保護作用的研究.pdf

1、第一部分姜黃素對乙醇誘導的大鼠原代肝細胞氧化損傷的保護作用
　　目的:以Sparague-Dawley大鼠(簡稱SD大鼠)原代肝細胞為研究對象,建立酒精肝損傷模型,探討酒精對肝細胞的氧化損傷以及姜黃素對其的保護作用,并探討姜黃素對肝細胞HO-1活性表達的誘導。
　　方法:1、分離并培養(yǎng)SD大鼠原代肝細胞,用不同濃度乙醇(0～200mmol/L)對大鼠原代肝細胞染毒8h,或者100mmol/L無水乙醇染毒不同時間(0～24h)

2、,檢測細胞的LDH釋放水平、AST水平以及氧化/抗氧化系統(tǒng)水平(MDA水平、GSH含量和SOD活性)。
　　2、100mmol/L無水乙醇染毒細胞前1h用不同劑量姜黃素(0～50μmol/L)預處理,或者乙醇染毒前不同時間(0～5h)用15μmol/L姜黃素預處理,檢測細胞LDH、AST、MDA水平,GSH含量和SOD活性。
　　3、梯度離心法分離提取各組肝細胞微粒體,檢測HO-1酶的活性。
　　結果:1、隨著乙醇濃度

3、的增加和作用時間的延長,大鼠原代肝細胞LDH釋放水平和AST水平顯著增高,MDA水平升高,GSH含量和SOD活性下降,在濃度為100mmol/L和時間為8h時影響程度明顯,P值均<0.05。
　　2、與乙醇對照組相比,提前用姜黃素干預可有效抑制LDH的釋放、抑制AST和MDA水平的升高,提高GSH含量以及SOD活性,預作用時間為1h、劑量為15μmol/L時差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3、姜黃素能上調HO-1蛋白

4、表達,提高肝細胞內HO-1酶的活性,以15μmol/L的劑量預作用1h時效果最明顯(P<0.05)。
　　結論:乙醇誘導的大鼠原代肝細胞氧化損傷程度與給予乙醇的濃度及其作用時間呈正相關,姜黃素能夠有效降低乙醇誘導的肝細胞氧化損傷,并能誘導HO-1發(fā)揮抗氧化作用。
　　第二部分姜黃素對BALB/c小鼠慢性酒精性肝損傷的干預作用
　　目的:以BALB/c小鼠為研究對象,建立慢性酒精性肝損傷模型,并探討姜黃素對酒精誘導的肝臟

5、氧化損傷的保護作用。
　　方法:1、將實驗小鼠隨機分為4組(A:正常對照組,B:姜黃素組,C:酒精組,D:酒精+姜黃素組),C、D兩組梯度酒精暴露6周(前四周灌胃量為2.4g/kg/day,后兩周增加到4g/kg/day)建立慢性酒精性肝損傷模型,B、D兩組給予75mg/kg/d的姜黃素行灌胃干預。
　　2、實驗結束后收集小鼠血液及肝組織標本,制作肝組織病理切片,檢測血清轉氨酶(AST、ALT)水平和脂質代謝(TC、TG、H

6、DL-C)水平。
　　3、檢測肝組織ROS含量和氧化/抗氧化系統(tǒng)水平(T-AOC、GSH、GPx、GST、MDA)。
　　結果:1、正常對照組和姜黃素組小鼠體重增長明顯大于酒精灌胃的兩組(P值均<0.05),但姜黃素的補充并未明顯改善由酒精灌胃所造成的體重增長緩慢這一情況。
　　2、與正常對照組相比,酒精灌胃組肝組織切片可見明顯的脂肪變性、血清轉氨酶AST、ALT水平提高(P<0.05),以及血清TC、TG含量升高(P

7、<0.05)、HDL-C含量降低(P>0.05)。給予姜黃素干預后,可見肝臟脂肪變性有明顯減輕,AST、ALT水平下降,血脂紊亂恢復正常。
　　3、與正常對照組相比,酒精灌胃組小鼠肝組織ROS含量顯著上升,T-AOC、GSH、GPx以及GST水平都顯著降低,MDA水平明顯升高,P值均<0.05。而酒精+姜黃素組小鼠肝組織ROS含量以及各項抗氧化、脂質過氧化指標均恢復正常。
　　結論:姜黃素能減輕酒精誘導的肝臟脂肪變性、抑制血