遠隔預處理對大鼠腦缺血后血管生成及其相關(guān)因子表達影響的研究.pdf

1、背景與目的:遠隔預處理(Remote ischemic preconditioning，RPC)是繼缺血預處理(IPC)后發(fā)現(xiàn)的一種在不同器官之間誘導缺血耐受的方法。它通過預先給予遠隔部位的器官或組織亞致死性的缺血刺激，來誘導另一器官或組織對致死性缺血損傷的耐受力。遠隔預處理的器官保護作用自發(fā)現(xiàn)以來，備受神經(jīng)學界的關(guān)注。目前，動物實驗以及臨床實驗均已證實遠隔預處理是一種有效且可行的腦保護誘導方式。但是遠隔預處理的分子生物學機制仍不明確。

2、血管生成是從先存血管產(chǎn)生新生血管的過程，它受血管生成因了和血管生成抑制因子的精細調(diào)節(jié)，是機體一項重要的修復再生程序，也是腦缺血后神經(jīng)功能修復的主要途徑之一。本實驗的目的在于研究遠隔預處理對局部腦缺血后缺血半暗帶區(qū)血管生成過程以及相關(guān)因子表達模式的影響，進一步揭示遠隔預處理介導腦保護的分子機制。
　　方法:雄性SD大鼠（鼠齡11-12周，體重270g-330g），隨機分為遠隔預處理(RPC)組、缺血對照(ISC)組和假手術(shù)(SH0)

3、組。腦缺血模型采用遠端大腦中動脈閉塞模型。遠隔預處理以同側(cè)股動脈夾閉15分鐘、復流15分鐘，循環(huán)三次的方式誘導。采用免疫組化CD31染色法計數(shù)RPC組、ISC組、SHO組缺血后1天、2天、3天、7天、14天缺血半暗帶區(qū)的微血管密度。免疫熒光CD31/BrdU雙標計數(shù)各小組缺血后2天、7天缺血半暗帶區(qū)新生血管數(shù)目。免疫組化法半定量計算各實驗小組缺血半暗帶區(qū)膜受體VEGFR-2、Tie-2的表達水平，WesternBlotting法半定量計

4、算血管生成因子VEGF-A、Ang-1、Ang-2、HIF-1 alpha的表達水平。圖片分析采用Image Proplus、Image J軟件，統(tǒng)計分析采用SPSS19.0軟件，p＜0.05顯示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:RPC組缺血半暗帶區(qū)微血管密度在缺血后1天、2天、7天、14天均高于ISC對照組，兩組差異有統(tǒng)計學意義，RPC組與ISC組半暗帶區(qū)微血管密度均于缺血后7天達峰。RPC組半暗帶區(qū)VEGFR-2蛋白表達水平亦高于

5、ISC組，兩組差異在缺血后1天、2天、3天、7天有統(tǒng)計學意義，且RPC與ISC組VEGFR-2表達量也在缺血后7天達峰，其時間演變規(guī)律與微血管密度相仿。缺血后半暗帶區(qū)Tie-2的上調(diào)在RPC組更為明顯，兩組蛋白水平差異在缺血后2天、3天、7天、14天有統(tǒng)計學意義，且RPC組蛋白表達上調(diào)較ISC組出現(xiàn)更早且持續(xù)時間更長。在缺血后2天、7天時RPC組VEGF-A、Ang-2蛋白表達量均高于ISC組，與之相反，Ang-1的表達量在缺血2天時R