老年大鼠腎臟缺血-再灌注損傷誘導腎小管上皮細胞凋亡的變化特點及機制研究.pdf

1、腎臟缺血是急性腎功能衰竭的常見原因，老年人對其易感性增加，但機制尚不清楚。腎缺血導致急性腎衰的原因是缺血/再灌注損傷，腎小管上皮細胞凋亡是其重要發(fā)生機制之一。機體衰老進程中也存在著細胞凋亡的失調，在生理狀態(tài)下腎小管上皮細胞凋亡隨增齡增加。但腎臟缺血/再灌注損傷時老年腎小管上皮細胞凋亡是否也更加明顯，以及細胞凋亡在老年缺血性急性腎衰中的作用尚無報道。目的：觀察老年大鼠腎臟缺血/再灌注損傷誘導腎小管上皮細胞凋亡的變化特點，及其與腎功能損傷和

2、腎臟病理改變的關系，探討細胞凋亡在老年缺血性急性腎衰中的作用；通過對caspase依賴的內源性凋亡(線粒體)途徑和外源性凋亡(死亡受體)途徑的研究以及環(huán)孢霉素A和(CsA)霉酚酸酯(MMF)對兩條凋亡途徑的干預，探討老年大鼠腎臟缺血/再灌注損傷誘導的腎小管上皮細胞凋亡變化的機制。方法：老年(27月齡)和青年(3月齡)雄性wistar大鼠按照隨機區(qū)組設計的原則分別分為假手術組、缺血/再灌注損傷模型組、CsA干預組及MMF干預組。雙側腎動脈

3、夾閉30min再灌注18h制作大鼠腎臟缺血/再灌注損傷模型。比色法測定血清肌酐(SCr)濃度；過碘酸-希夫氏堿(PAS)染色觀察腎臟組織病理改變；原位末端標記(TUNEL)法及DNA電泳觀察腎小管上皮細胞凋亡情況；比色法測定腎組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；Northernblot檢測腎組織Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3mRNA表達；RT-PCR檢測腎組織caspase-8、9mRNA表達；Wes

4、ternblot檢測胞漿細胞色素c、caspase-3、8、9蛋白表達。結果：生理狀態(tài)下老年大鼠SCr水平明顯高于青年大鼠，腎組織可以見到病理改變；腎臟缺血/再灌注損傷時，兩年齡模型組大鼠SCr均明顯升高，腎臟組織病理改變明顯加重，老年鼠的上述變化較青年鼠更為顯著(P＜0.05)；老年假手術組大鼠腎組織凋亡細胞數目明顯多于相應青年大鼠(分別為1.53±0.24％和0.99±0.17％，P＜0.05)；兩年齡模型組大鼠腎小管上皮細胞凋亡程

5、度都較相應假手術組明顯加重(P＜0.05)，而老年大鼠的變化較青年大鼠更加明顯(TUNEL陽性細胞數分別增加25.70±4.99倍和19.61±2.15倍，P＜0.05)；腎臟缺血/再灌注損傷時，老年及青年模型組大鼠腎組織中SOD活性都明顯降低(P＜0.05)，MDA含量都明顯增加(P＜0.05)，同時線粒體途徑中的相關物質(Bax/Bcl-2、胞漿細胞色素c、caspase-9)和死亡受體途徑中的相關物質(Fas、caspase-8)

6、，以及兩者共同的下游物質caspase-3的表達都明顯增加(P＜0.05)；相同的損傷條件下，老年大鼠SOD活性、MDA含量的變化，以及Bax/Bcl-2、胞漿細胞色素c、caspase-9、caspase-3表達的增加較青年鼠更為明顯(P＜0.05)，而Fas和caspase-8表達的變化與青年鼠無明顯差異(P＞0.05)。CsA及MMF均能減輕老年及青年大鼠腎小管上皮細胞凋亡(P＜0.05)，但CsA對老年大鼠的作用較青年鼠更為顯著