中國(guó)人群尋常型魚(yú)鱗病及尋常型銀屑病Filaggrin突變研究.pdf

1、第一部分三個(gè)中國(guó)尋常型魚(yú)鱗病家系Filaggrin突變研究
　　尋常型魚(yú)鱗病(Ichthyosis Vulgaris，IV, OMIM#146700)是一種常見(jiàn)的遺傳性角化障礙性皮膚病，發(fā)病率在1∶5300到1∶250之間，通常在出生后一年內(nèi)發(fā)病，好發(fā)于四肢伸側(cè)及背部，以小腿最為明顯。IV臨床異質(zhì)性較大，病情輕者僅表現(xiàn)為冬季皮膚干燥、粗糙，表面有細(xì)碎的糠樣鱗屑;典型的皮損表現(xiàn)為灰褐色或深褐色菱形或多角形鱗屑，鱗屑中央固著，邊緣游離

2、，如魚(yú)鱗狀;其他臨床特征還表現(xiàn)為掌跖線狀裂、掌紋加深、遺傳性過(guò)敏癥和熱耐受不良。
　　FLG失去功能的突變被公認(rèn)為是IV的致病因素。到目前為止，在尋常型魚(yú)鱗病患者中報(bào)道的FLG突變種類(lèi)已接近30種。Filaggrin基因(OMIM#135940)位于1q21.3，由3個(gè)外顯子組成，3號(hào)外顯子長(zhǎng)12.7-14.7kb，由10-12個(gè)幾乎完全一樣的重復(fù)區(qū)組成，編碼幾乎整個(gè)profilaggrin，是人類(lèi)基因組外最大的外顯子之一;Fil

3、aggrin蛋白由S100鈣離子結(jié)合區(qū)、B結(jié)構(gòu)域、2個(gè)FLG不完全重復(fù)區(qū)、10-12個(gè)FLG重復(fù)區(qū)和C-端組成。C-末端結(jié)構(gòu)域是profilaggrin水解成filaggrin單體所必需的結(jié)構(gòu)，F(xiàn)LG失去功能的突變使profilaggrin缺失C-末端結(jié)構(gòu)域而無(wú)法正常水解，最終使表皮顆粒層filaggrin單體減少或缺失。
　　為了鑒定3個(gè)尋常型魚(yú)鱗病家系的致病變異，本研究首先對(duì)家系的先證者開(kāi)展了FLG突變研究，結(jié)果在家系1的先證

4、者中鑒定了2個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的變異(c.477-478insA，c.6218-6219delAA)和一個(gè)外來(lái)的已知致病變異c.3321delA。隨后對(duì)家系1進(jìn)行疾病共分離研究，發(fā)現(xiàn)c.477-478insA與家系1疾病共分離;c.6218-6219delAA是一個(gè)新發(fā)突變;c.3321delA與家系中外來(lái)的一支共分離。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，我們將變異c.477-478insA與家系進(jìn)行了連鎖分析，結(jié)果得到LOD值大于1的結(jié)果，支持該位點(diǎn)與疾

5、病連鎖;同時(shí)使用TA克隆測(cè)序方法對(duì)c.6218-6219delAA進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果證實(shí)了該位點(diǎn)是家系1先證者新發(fā)的變異;這2個(gè)突變?cè)?00個(gè)正常對(duì)照中均未檢測(cè)到，進(jìn)一步證明了它們是致病變異。此外，在家系2和3中均鑒定到了已知致病變異c.3321delA。這些結(jié)果豐富了中國(guó)人群FLG突變譜。
　　第二部分中國(guó)人群尋常型銀屑病Filaggrin突變研究
　　銀屑病(Psoriasis，OMIM#177900)，是一種以紅斑、鱗屑

6、為主要表現(xiàn)的慢性炎癥性、免疫介導(dǎo)的皮膚疾病。臨床可分為四種亞型:尋常型銀屑病、關(guān)節(jié)型銀屑病、膿皰型銀屑病及紅皮病型銀屑病，其中尋常型銀屑病為最常見(jiàn)的類(lèi)型。因人種遺傳背景不同該病的人群患病率為0.1％～3％，中國(guó)漢族人發(fā)病率為0.123％。
　　銀屑病的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，已有研究表明:環(huán)境、遺傳因素和免疫炎癥反應(yīng)均在其發(fā)生和病理過(guò)程中起到十分重要的作用。通過(guò)全基因組掃描和連鎖分析至少已鑒定了9個(gè)銀屑病易感位點(diǎn)(PSORS1-

7、9)。Filaggrin（FLG）是位于易感區(qū)間1q21的一個(gè)重要候選基因。FLG自發(fā)突變體小鼠(5303delA)皮損部位出現(xiàn)類(lèi)似銀屑病的炎性特征，其他研究小組在銀屑病患者皮膚中檢測(cè)到filaggrin表達(dá)量和表達(dá)模式都發(fā)生了顯著變化，提示FLG可能與銀屑病的發(fā)生相關(guān)。為了證明FLG與銀屑病的相關(guān)性，研究小組分別在德國(guó)、愛(ài)爾蘭和英國(guó)人群銀屑病患者中開(kāi)展的關(guān)聯(lián)研究，結(jié)果顯示FLG突變與銀屑病的發(fā)生無(wú)關(guān)。到目前為止，還沒(méi)有遺傳學(xué)證據(jù)表明F

8、LG與銀屑病的發(fā)生有關(guān)。
　　本課題組許曉娟博士2009年采集到1個(gè)來(lái)自湖南岳陽(yáng)的家系，這個(gè)家系的特點(diǎn)是銀屑病與魚(yú)鱗病患者共存:先證者表現(xiàn)為典型的銀屑病癥狀，而先證者的外婆和姑姑為魚(yú)鱗病患者。這個(gè)家系提示銀屑病與魚(yú)鱗病可能存在共同的發(fā)病機(jī)制。許曉娟隨后對(duì)這個(gè)特殊的銀屑病家系進(jìn)行了FLG突變研究，發(fā)現(xiàn)先證者攜帶FLG p.K4022X純合突變，而家系的魚(yú)鱗病患者攜帶p.K4022X雜合突變，這個(gè)結(jié)果提示我們p.K4022X的純合突變

9、可能導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生。
　　本研究為了進(jìn)一步明確FLG與銀屑病易感性的關(guān)系，我們首先在441例患者和500個(gè)正常對(duì)照中針對(duì)p.K4022X進(jìn)行了突變檢測(cè)，結(jié)果檢測(cè)到了2例患者攜帶p.K4022X的純合改變，而在正常人中未發(fā)現(xiàn)純合改變，提示純合突變可能導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生。另外分別在29例患者(6.6％)和15個(gè)正常對(duì)照(3％)中檢測(cè)到了p.K4022X的雜合改變。隨后我們開(kāi)展了p.K4022X病例-對(duì)照關(guān)聯(lián)研究，結(jié)果顯示p.K4022

10、X在441例銀屑病患者和500個(gè)對(duì)照樣本間的基因型頻率和等位基因頻率比較的P值分別為0.011和0.002(p＜0.05)，說(shuō)明差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)相對(duì)危險(xiǎn)度(OR)大于1，且95％可信區(qū)間下限大于1(OR=2.552(95％CI=1.377-4.731))，提示p.K4022X是中國(guó)人群銀屑病發(fā)生的危險(xiǎn)因素。
　　其次，為了進(jìn)一步研究FLG突變與銀屑病的關(guān)系，我們分析了441例患者的整個(gè)FLG編碼區(qū)序列，發(fā)現(xiàn)了5個(gè)無(wú)義或移

11、碼突變:一個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的無(wú)義突變(p.W2583X)和4個(gè)在尋常型魚(yú)鱗病或特異性皮炎中報(bào)道過(guò)的突變(p.R826X，c.3321delA，p.Q2417X，c.7945delA)。
　　此外，我們?cè)阢y屑病患者中還鑒定了18個(gè)錯(cuò)義突變。其中p.E2652D在2個(gè)銀屑病/魚(yú)鱗病共存的家系中都鑒定到，2個(gè)家系中3個(gè)銀屑病患者均攜帶該純合突變，而2個(gè)魚(yú)鱗病患者和3個(gè)表型正常的個(gè)體攜帶該雜合變異，提示p.E2652D的純合突變可能導(dǎo)致銀屑病的