塞來昔布對卵巢癌SKOV3細(xì)胞順鉑化療的增敏作用及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　通過體外實(shí)驗(yàn)觀察非甾體抗炎藥塞來昔布對卵巢癌SKOV3細(xì)胞順鉑化療的增敏作用，并探討可能的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1、MTT法檢測不同濃度塞來昔布對SKOV3細(xì)胞的生長抑制作用，并篩選出無毒劑量濃度，作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。
　　2、MTT法檢測順鉑聯(lián)合無毒劑量塞來昔布對SKOV3的細(xì)胞毒性。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測順鉑聯(lián)合無毒劑量塞來昔布對SKOV3細(xì)胞凋亡率的影響。
　　4、R

2、eal-Time PCR、Western Blot檢測順鉑與無毒劑量塞來昔布聯(lián)合用藥后SKOV3細(xì)胞中Survivin mRNA及蛋白的表達(dá)變化。
　　5、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測順鉑與無毒劑量塞來昔布聯(lián)合用藥后SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)基中前列腺素E2的含量。
　　結(jié)果:
　　1、MTT結(jié)果顯示:COX-2特異性抑制劑塞來昔布對卵巢癌SKOV3細(xì)胞具有生長抑制作用，且呈時(shí)間-劑量依賴性。當(dāng)塞來昔布濃度≤10uM/L

3、時(shí)，對SKOV3細(xì)胞生長無顯著抑制作用（抑制率＜10％），因此篩選10uM作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。
　　2、MTT結(jié)果顯示:10uM塞來昔布與順鉑聯(lián)合應(yīng)用顯著抑制SKOV3細(xì)胞的生長，生長抑制率明顯高于單用塞來昔布組和順鉑組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)，且呈時(shí)間依賴性(F=204.287，P=0.000)，根據(jù)金正鈞法計(jì)算兩藥聯(lián)合作用24、48和72h后的合并效應(yīng)q值，分別為1.27、1.37、1.38，均＞1.15，表現(xiàn)為增敏

4、作用。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果:10uM塞來昔布與順鉑聯(lián)合作用SKOV348h后細(xì)胞凋亡率達(dá)46.98％，高于單用DDP組的27.99％。
　　4、Real-Time PCR及Weatern Blot檢測結(jié)果表明:l0uM塞來昔布與順鉑聯(lián)合作用SKOV348h后，細(xì)胞中Survivin mRNA及蛋白相對表達(dá)量均明顯低于單用順鉑組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。
　　5、ELISA法檢測結(jié)果顯示:10uM塞來昔布

5、與順鉑聯(lián)合作用SKOV3細(xì)胞48h后，培養(yǎng)基中人PGE2含量與單用塞來昔布組比較沒有明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、非甾體抗炎藥塞來昔布對卵巢癌SKOV3細(xì)胞具有生長抑制作用，且呈時(shí)間-劑量依賴性;
　　2、塞來昔布可增加卵巢癌SKOV3細(xì)胞對順鉑化療的敏感性，呈時(shí)間依賴性;
　　3、塞來昔布對卵巢癌SKOV3細(xì)胞順鉑化療的增敏作用可能與下調(diào)了Survivin基因及蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān);