番木瓜采后果實(shí)成熟特異表達(dá)基因的研究.pdf

1、本研究旨在分離番木瓜采后在果實(shí)中特異表達(dá)的基因，進(jìn)而鑒定這些基因在番木瓜果實(shí)成熟過程中的作用。對(duì)采后自然成熟番木瓜果實(shí)的硬度變化情況進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，番木瓜果實(shí)采后自然成熟條件下硬度呈逐漸下降趨勢(shì)。將采后番木瓜果實(shí)按果皮顏色可分為六級(jí)，其中一級(jí)硬度為14.7kg/cm2，六級(jí)為2.0kg/cm2，結(jié)合Paull(1996)對(duì)采后番木瓜乙烯變化的結(jié)論：乙烯含量在果色破色前(一級(jí))最微，到開始變軟(三至四級(jí))時(shí)達(dá)到高峰以后迅速下降，而此

2、時(shí)番木瓜還沒有達(dá)到食用風(fēng)味最佳，也沒有達(dá)到成熟，因此相比而言我們使用硬度為指標(biāo)進(jìn)行選擇比較方便可行。當(dāng)番木瓜為五級(jí)時(shí)，食用風(fēng)味最佳，糖分和芳香味等指標(biāo)都達(dá)到最好的程度。根據(jù)這一結(jié)果，選取采后一級(jí)和五級(jí)番木瓜果實(shí)(1號(hào)、2號(hào))，以2號(hào)作為檢測子、1號(hào)作為驅(qū)動(dòng)子，進(jìn)行正向抑制差減雜交。用T/A法構(gòu)建正向差減文庫(含221個(gè)克隆)。采用PCR方法篩選正向差減文庫獲得138個(gè)重組子，對(duì)這些重組子進(jìn)行array(反向Northern點(diǎn)雜交)，篩選

3、出在1號(hào)和2號(hào)中表達(dá)有明顯差異的cDNA片段67個(gè)，再對(duì)這些篩選出的cDNA插入片段進(jìn)行了序列測定，結(jié)果表明：共有58個(gè)cDNA的測序結(jié)果可進(jìn)行BLASTn和BLASTx分析。其中：22個(gè)cDNA序列與數(shù)據(jù)庫中功能未知的核酸序列的同源性達(dá)60～90％，占總cDNA片段的38％；32個(gè)cDNA序列推導(dǎo)出的氨基酸序列與功能己知的cDNA推導(dǎo)出的氨基酸序列同源性達(dá)60～100％(比較的核酸長度均在200bp以上)，約占62％；在這些cDNA序

4、列中，有1個(gè)cDNA序列與己發(fā)表的來源于番木瓜的已知功能的基因序列同源性高達(dá)97％，還有兩個(gè)序列與番木瓜未知功能的基因具有95％的同源率，其他的序列很大一部分也代表了與果實(shí)成熟基因有關(guān)。 本研究采用SSH和反向Northern點(diǎn)雜交相結(jié)合的方法對(duì)番木瓜采后果實(shí)中基因表達(dá)的變化進(jìn)行了研究，獲得了67個(gè)有明顯表達(dá)差異的EST序列，初步分析了番木瓜采后成熟與品質(zhì)形成的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，并得到了一批未知的新基因片段，為克隆和鑒定新功能基因奠定