不良心理應激對人卵巢上皮性癌發(fā)生、發(fā)展影響的實驗和臨床研究.pdf

1、研究背景與總體思路：
　　 卵巢癌一經(jīng)發(fā)現(xiàn),約70％即為晚期,因而其五年生存率始終徘徊在25％-30％,死亡率高居婦科惡性腫瘤之首。患者一經(jīng)診斷,精神、心理壓力增大,直接影響到臨床治療和預后。
　　 近年來,隨著醫(yī)學模式從單一的生物醫(yī)學向生物-心理-社會模式的轉(zhuǎn)換,心理社會因素對腫瘤患者的影響越來越受到國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注,但其作用機制尚不明嘹。目前,心理干預和免疫治療已成為腫瘤綜合治療的重要內(nèi)容,但其療效尚未達成共識。

2、因此,深入研究心理與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,利用心理治療來阻止腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,或者通過改變腫瘤患者的免疫狀態(tài)來控制腫瘤,已越來越成為醫(yī)學研究所關(guān)注的重點。但由于人的心理因素的多樣性,難以統(tǒng)一控制,采用應激動物模型來研究心理因素對腫瘤的影響,有利于統(tǒng)一標準,重復性好,可控制性強,觀察周期短,有望獲得理想的結(jié)果。該課題分兩部分進行:(1)通過建立人卵巢癌荷瘤裸鼠模型,研究不良心理應激與卵巢腫瘤免疫的關(guān)系,探討不良心理應激在荷瘤裸鼠腫瘤發(fā)生、

3、發(fā)展中的作用,最終為臨床上對卵巢癌患者進行心理和免疫治療提供實驗依據(jù)；(2)采用臨床心理評定量表,以現(xiàn)場調(diào)查問卷方式,了解婦科惡性腫瘤患者的社會心理特點和心身健康狀況,從臨床角度進一步研究不良心理因素與婦科惡性腫瘤發(fā)生的關(guān)系。
　　 目的:
　　 1、利用人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠建立卵巢癌不良心理應激模型,對荷瘤裸鼠給予順鉑(DDP)進行治療,觀察在化療和非化療兩種狀態(tài)下,不良心理應激對人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠移植瘤生長體積

4、、瘤體重量、移植瘤組織中p53、NFκ Bp65蛋白的表達及荷瘤裸鼠神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能的影響,探討不良心理應激在人卵巢上皮性癌荷瘤裸鼠腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用,為臨床上對卵巢癌患者進行心理和免疫治療提供實驗依據(jù)。
　　 2、采用臨床心理評定量表中的生活事件量表(LES)和90項心理癥狀核查表(SCL-90),對60例婦科惡性腫瘤患者遭遇的生活事件和心身健康狀況進行問卷調(diào)查,與同期住院的良性腫瘤者和健康者各40例相比較。
　

5、　 方法:
　　 1、采用人卵巢上皮性癌組織建立裸鼠皮下移植瘤模型,并進行鼠間傳代移植。觀察皮下瘤生長情況。待腫瘤直徑達0.8cm～1cm時,將其切下剪成直徑lmm～2mm小塊,再接種至另一裸鼠皮下進行傳代。腫瘤均行病理組織學檢查；將腫塊制成單細胞懸液,體外培養(yǎng)并觀察染色體特征。本實驗采用穩(wěn)定傳代四次的裸鼠皮下移植瘤進行研究。
　　 2、采用束縛法建立不良心理應激模型,操作時依次將應激組裸鼠放入50ml離心管中(打孔3

6、mm,通風良好),不擠壓動物尾巴,放入管內(nèi)動物可前后活動,8h后將動物放出,恢復自由供食物和水,每天束縛應激8h(10:00AM-6:00PM),5d/周(防止適應),共2周。實驗結(jié)束后第二天,眼眶取血,處死裸鼠,剝除瘤體稱重,并做檢測。
　　 3、實驗共分6組
　　 (1)正常生長組(陰性對照組):腹腔注射生理鹽水(NS)；
　　 (2)正常生長+應激組(陽性對照):腹腔注射NS,給予束縛應激；
　　

7、(3)荷瘤組(荷瘤陰性對照組):腹腔注射NS；
　　 (4)荷瘤治療組(荷瘤陽性對照組):腹腔注射順鉑(DDP)；
　　 (5)荷瘤+應激組(實驗組):腹腔注射NS,給予束縛應激:
　　 (6)荷瘤治療+應激組(實驗組):腹腔注射DDP,給予束縛應激；
　　 (1)～(2)組無腫瘤,(3)～(6)組是腫瘤組。(1)、(2)、(3)和(5)組給予生理鹽水(NS)0.2ml/20g,(4)和(6)組給予順鉑(

8、DDP)3mg/kg,0.2ml/20g(將順鉑配制成0.3mg/ml的注射液)。每3d腹腔注射1次,共注射4次。
　　 4、觀察各組裸鼠生存狀態(tài)、體重、腫瘤生長情況(腫瘤體積、瘤重及抑瘤率)及腫瘤組織形態(tài)學變化。
　　 5、Western Blotting檢測各組腫瘤組織中p53、NFκ Bp65蛋白的表達。
　　 6、ELISA方法檢測各組裸鼠血清中的皮質(zhì)酮(CORT)、5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(

9、NE)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子-α(TNF-α),MTT方法檢測各組裸鼠脾組織中NK細胞的活性。
　　 7、采用臨床心理評定量表中的生活事件量表(LES)和90項心理癥狀核查表(SCL-90),對60例婦科惡性腫瘤患者遭遇的生活事件和心身健康狀況進行問卷調(diào)查,與同期住院的良性腫瘤者和健康者各40例相比較。
　　 結(jié)論:
　　 1、采用束縛方法成功建立了不良心理應激模型。

10、>　　 2、不良心理應激可導致人卵巢癌荷瘤裸鼠腫瘤的重量明顯增加。順鉑化療可導致移植瘤生長抑制,但同時給予不良心理應激,可促使腫瘤細胞生長加速,導致腫瘤的重量增加,明顯降低化療效果。
　　 3、不良心理應激可導致人卵巢癌荷瘤裸鼠p53、NFκ Bp65的蛋白表達增強。順鉑化療可導致兩者表達減弱,說明化療有效,但是若此時給予不良心理應激,兩者表達反而出現(xiàn)增強,甚至其增加水平超過未治療狀態(tài)。說明不良心理應激可通過增強p53、NFκ

11、 Bp65蛋白的表達,降低化療效果,導致腫瘤細胞生長加速。
　　 4、不良心理應激通過下丘腦一垂體一腎上腺軸的激活,導致荷瘤裸鼠神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào),皮質(zhì)酮、去甲腎上腺素過量合成,5-羥色胺分泌紊亂,從而通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)的介導,破壞大腦情緒調(diào)節(jié)中樞正常功能的表達,降低機體的免疫功能。在化療狀態(tài)下,不良心理應激導致神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)更加嚴重。
　　 5、不良心理應激可導致卵巢癌荷瘤裸鼠血清中的TNF-α和IL-6值明顯升高,