腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體在多發(fā)性肌炎-皮肌炎發(fā)病機(jī)制中的研究.pdf

1、目的:
　　1、通過血清可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor NecrosisFactor-Related Apoptosis-Inducing Ligand，TRAIL)與多發(fā)性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis，PM/DM)臨床特點(diǎn)的相關(guān)性分析，研究可溶性TRAIL作為PM/DM血清標(biāo)記物的臨床意義。
　　2、通過檢測TRAIL及其受體在PM/DM患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞

2、中的表達(dá)，研究TRAIL及其受體對PM/DM外周血CD3+T淋巴細(xì)胞凋亡的影響。
　　3、通過檢測c-FLIP、caspase-8在PM/DM患者CD3+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)，推測抗凋亡蛋白c-FLIP在PM/DM外周血CD3+T淋巴細(xì)胞中的作用，并探討caspase-8對TRAIL誘導(dǎo)CD3+T淋巴細(xì)胞凋亡可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1、PM/DM患者外周血可溶性TRAIL的水平及其與臨床特征的相關(guān)性。采用酶聯(lián)免疫吸

3、附法(ELISA)檢測2012年10月到2013年8月中日友好醫(yī)院風(fēng)濕免疫科40例PM/DM患者，20例健康人血清中sTRAIL的水平。分析sTRAIL水平與PM/DM各臨床特點(diǎn)的關(guān)系。
　　2、TRAIL及其受體在PM/DM患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。采用流式細(xì)胞術(shù)對40例PM/DM患者和20例健康人的外周血CD3+T淋巴細(xì)胞表面TRAIL及其受體DR4、DR5的表達(dá)進(jìn)行檢測。用流式細(xì)胞術(shù)分選并檢測不同濃度TRAIL刺

4、激CD3+T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后的的凋亡率。
　　3、c-FLIP、caspase-8在PM/DM患者CD3+T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。通過WesternBlotting對PM/DM患者CD3+T淋巴細(xì)胞中c-FLIP及caspase-8的表達(dá)進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果:
　　1、PM/DM患者組血清sTRAIL水平為1380.71±126.49 ng/L，顯著高于健康對照組493.89±33.32 ng/L(P＜0.05)。而有吞咽困

5、難的PM/DM患者血清sTRAIL水平1775.76±321.95 ng/L顯著高于無吞咽困難的PM/DM患者血清sTRAIL水平958.24±155.66 ng/L(P＜0.05)。合并肺間質(zhì)病變的患者與未合并肺間質(zhì)病變患者的血清sTRAIL水平無顯著差異(P＞0.05)。Jo-1陽性的患者組血清sTRAIL水平為562.36±52.99 ng/L顯著低于Jo-1陰性的患者組1334.57±181.21 ng/L(P＜0.05)。PM

6、/DM患者血清sTRAIL水平與乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)呈顯著性負(fù)相關(guān)(r=-4.03，P＜0.05)。
　　2、PM/DM組CD3+T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的mTRAIL陽性表達(dá)率(％)為28.39±9.16，健康對照組為19.87±8.40(P＜0.05)。PM/DM組CD3+T淋巴細(xì)胞表面表達(dá)的DR4、DR5的陽性表達(dá)率(％)分別為27.09±10.34，29.06±9.54。健康對照組分別為

7、19.72±8.59，19.22±9.27(P＜0.05)。PM/DM組的mTRAIL、DR4、DR5的陽性表達(dá)率均顯著高于健康對照組。不同濃度TRAIL(0，5，10，50，100ng/mL)刺激CD3+T淋巴細(xì)胞24小時(shí)后，檢測其凋亡率，PM/DM組CD3+T淋巴細(xì)胞凋亡率(％)分別為25.63±8.79，33.04±12.31，42.42±10.72，80.74±14.52，69.9±16.99。對照組的凋亡率(％)分別為18.7

8、2±12.48，23.23±17.00，24.69±9.15，26.64±13.28，20.32±11.07不同濃度TRAIL蛋白刺激CD3+T淋巴細(xì)胞24h后，PM/DM患者的凋亡率均高于對照組。
　　3、Western Blotting結(jié)果顯示，與健康對照組相比，PM/DM組的CD3+T淋巴細(xì)胞中c-FLIP在PM/DM組為1.34±0.05，顯著高于健康對照組0.44±0.05(P＜0.01)。而Caspase-8在PM/D