貝伐單抗與恩度聯(lián)合伊立替康瘤內注射治療鼠結腸癌模型的研究.pdf

1、目的:
　　1.觀察伊立替康(Irinotecan，CPT-11)、貝伐單抗(bevacizumab，Bev)、恩度(Endostar，En)單用及聯(lián)合用藥瘤內注射治療裸鼠結腸癌模型的抗腫瘤療效。
　　2.觀察伊立替康、貝伐單抗、恩度單用及聯(lián)合用藥瘤內注射的不良反應。
　　3.探討伊立替康、貝伐單抗、恩度單用及聯(lián)合用藥瘤內注射后對裸鼠結腸癌移植瘤組織血管生成和腫瘤細胞增殖的作用。
　　方法:培養(yǎng)人結腸癌HT-29

2、細胞，建立BALB/c裸鼠人結腸癌HT-29細胞單側背部皮下移植瘤模型，種瘤后10天，移植瘤體積為150mm3時，將30只裸鼠隨機分為5組:A組(NS組)、B組(CPT-11組)、C組（Bev+CPT-11組）、D組（Bev+En組）、E組(Bev+CPT-11+En組，給藥途徑均為瘤內注射，劑量為Bev5mg/Kg，CPT-1140mg/kg，En10mg/kg。每2天觀察1次，測量移植瘤長徑、短徑，并記錄腫瘤體積（V=0.5×長徑×

3、短徑2），給藥結束后繼續(xù)觀察12天將全部裸鼠處死。比較各組移植瘤體積增長情況及增長速度;比較各組移植瘤濕重;比較各組抑瘤率(TGI，tumor growth inhibition)、腫瘤倍增時間(DT，thedoubling time)及腫瘤特定生長率（SGR，specific growth rate）。觀察各組裸鼠臟器、淋巴結腫瘤轉移情況。評價藥物不良反應:比較各組裸鼠移植瘤局部破潰出血、消化道反應、胃腸道出血穿孔、體重增減情況;比較

4、各組給藥結束后第8天裸鼠血常規(guī)。免疫組化檢測各組移植瘤組織微血管密度標志物CD31、腫瘤細胞增殖相關核抗原Ki67的表達情況。
　　結果:比較觀察各組移植瘤生長情況，并以給藥時間為橫坐標，移植瘤體積為縱坐標繪制荷瘤鼠移植瘤生長曲線圖，結果顯示各組移植瘤生長速度由快到慢依次為:A組、D組、B組、C組、E組。觀察結束時各組移植瘤濕重值從大到小依次為A組:1.30±0.07g;D組，0.83±0.07g;B組，0.69±0.06g;C組

5、，0.50±0.04g;E組，0.30±0.03g，兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義。除此之外，為評價藥物對移植瘤生長抑制作用大小，我們比較了各組抑瘤率(TGI)、腫瘤倍增時間(DT)及腫瘤特定生長率(SGR)，結果顯示各組抑瘤療效從小到大依次為:A組、D組、B組、C組、E組，各組TGI、DT、SGR值分別為:A組(DT7.30d, SGR9.50％/d);D組(25.50％,8.52d,8.40％/d);B組(47.57％,9.59d,7.

6、23％/d);C組(67.79％,12.22d,5.67％/d);E組(89.03％,23.89d，2.90％/d)。以上結果均提示:伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內注射均有抑制裸鼠結腸癌移植瘤增長的作用，其中貝伐單抗、恩度聯(lián)合伊立替康瘤內注射后顯著增強了抑瘤療效。
　　處死裸鼠后解剖檢查裸鼠臟器、淋巴結腫瘤轉移情況，發(fā)現(xiàn)各組裸鼠肝臟、脾臟、腹腔、肺均未見腫瘤轉移。A組鄰近移植瘤腋窩淋巴結平均轉移個數(shù)為0.5個，腹腔、腹

7、股溝等部位未見淋巴結轉移，實驗組均未見淋巴結轉移。
　　各組藥物瘤內注射后副反應少，觀察期間裸鼠均無移植瘤破潰出血、消化道反應、體重減輕、胃腸道出血穿孔、突發(fā)死亡、骨髓抑制現(xiàn)象發(fā)生。
　　為觀察各組藥物瘤內注射后對腫瘤血管生成的影響，以免疫組化方法檢測剝離的移植瘤組織微血管標志物CD31表達情況，Weidner法計算微血管密度，結果顯示A組、B組、C組、D組、E組微血管數(shù)分別為每200倍視野:52.5±2.41、50.5±2

8、.88、36.25±2.75、23.30±2.78、21.10±2.43個。A組與B組比較，P=0.204，D組與E組比較，P=0.164，差異均無統(tǒng)計學意義，C、D、E組與A、B組比較，D、E組與C組比較，差異均有統(tǒng)計學意義。A、B組血管紊亂、粗大、扭曲，分支多，大小不一，形態(tài)不規(guī)則，C、D、E組血管變細，分支減少，大小形態(tài)更統(tǒng)一，其中以D、E組更明顯。結果提示，恩度增強了貝伐單抗抑制血管新生、血管正?；饔茫亮⑻婵祵δ[瘤血管影響

9、較小。
　　為觀察各組藥物瘤內注射后對腫瘤細胞增殖的影響，以免疫組化方法檢測剝離的移植瘤組織腫瘤細胞增殖相關核抗原Ki67表達情況，200倍鏡下計數(shù)1000個腫瘤細胞中Ki67陽性細胞的數(shù)目為Ki67陽性率，結果顯示A組、B組、C組、D組、E組Ki67陽性率分別為:82.71％±5.60％、57.83％±3.92％、45.68％±3.29％、70.88％±4.03％、29.32％±2.61％，兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學意義。結果提示

10、，伊立替康抑制腫瘤細胞增殖，貝伐單抗、恩度抑制腫瘤細胞作用較弱，貝伐單抗、恩度與伊立替康聯(lián)用后顯著增強了抑制腫瘤細胞增殖的作用。
　　結論:
　　1.伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內注射均有抑制裸鼠結腸癌移植瘤增長的作用，其中貝伐單抗、恩度聯(lián)合伊立替康瘤內注射后顯著增強了抑瘤療效。
　　2.伊立替康、貝伐單抗、恩度單用或聯(lián)合用藥瘤內注射副反應少，無移植瘤局部破潰出血、消化道反應、胃腸道穿孔、體重減輕、骨髓抑制