鐵線蓮遺傳多樣性、雜交育種及離體快繁研究.pdf

1、鐵線蓮是毛茛科（Ranunculaceae）鐵線蓮屬（ClematisL.）植物,是一類觀賞價值高、具多種抗逆性的藤本花卉。本實驗在收集國內外的鐵線蓮種質資源基礎上，運用ISSR技術結合田間性狀觀察，對鐵線蓮遺傳多樣性進行研究；選擇不同的父母本組合進行雜交，研究雜交技術，初步觀察雜種后代性狀，篩選觀賞價值高并適宜南方栽培的品種；同時，進行鐵線蓮離體快繁技術的研究。研究結果將為鐵線蓮種質資源分類提供科學依據(jù)，為新品種選育提供理論基礎。

2、r>　　1．通過優(yōu)化反應參數(shù)，建立了鐵線蓮ISSR-PCR分析的反應體系：25uL體系中含模板DNA40ng，引物濃度為0.4μM，dNTPs濃度為0.20mM，Taq酶的用量為lU，10×Buffer2μL；研究不同ISSR引物適宜的退火溫度，篩選出13條多態(tài)性高的引物，PCR擴增程序為：94℃預變性5min，94℃變性50s，51.8-54℃退火1min，72℃延伸1min，40個循環(huán)；72℃延伸10min，4℃下保存。對32份鐵線

3、蓮材料及2個近緣屬材料進行ISSR分析，共擴增出172條條帶，平均每條引物擴增出13.23條譜帶。13條引物共擴增出多態(tài)性位點168個，平均每個引物擴增多態(tài)性位點12.92個，多態(tài)性位點百分率為98.24％。ISSR分析結果顯示，34份材料間的遺傳相似距離在0.22～1.21之間；32份鐵線蓮材料在遺傳距離為1.01處分為三大類，在遺傳距離0.77處可分為13個小組。
　　2．選擇5個鐵線蓮親本組合進行雜交試驗，其中，‘烏托邦'作

4、為父本和‘丹青'雜交組合沒有獲得種子，其余4個組合‘丹青'和‘烏托邦'、‘波蘭精神'和‘丹青'、‘克天使'和‘王夢'‘王夢'和‘丹青'收獲到105粒種子，平均結實數(shù)為21粒，五個組合平均結實率為70.93%；共有92粒鐵線蓮種子發(fā)芽，平均發(fā)芽百分數(shù)為69.02%；F1代播種苗的開花株數(shù)共33棵。從開花株中選出7株觀賞性較高的植株。
　　3．本試驗探索了鐵線蓮‘王夢’的外植體消毒方法和快繁較適培養(yǎng)基。‘王夢’莖段的消毒處理以0.1%