TNF-α對體外培養(yǎng)仔豬睪丸支持細胞中Fas-FasL表達的調節(jié).pdf

1、支持細胞(Sertoli cells，SCs)是維持睪丸免疫豁免功能的重要體細胞，主要通過形成血睪屏障(BTB)、高表達FasL、分泌免疫抑制因子（如TGF-β、IL-1、IGF-Ⅱ等）來實現(xiàn)其免疫豁免功能。腫瘤壞死因子(TNF)屬TNFSFL家族成員，包括TNF-α和TNF-β兩種類型，睪丸中主要分泌的是TNF-α。TNF-α通過與SCs上的受體結合，影響SCs分泌功能，調節(jié)FSH誘導的SCs生精功能和SCs參與的BTB的開閉及SCs

2、免疫調節(jié)因子的分泌，進而影響SCs的各種功能。但目前TNF-α是調節(jié)SCs中Fas/FasL系統(tǒng)的表達的機制還不完善。本研究的目的是探索TNF-α對SCs中Fas/FasL的表達的影響以及調節(jié)Fas/FasL表達的分子機制。
　　本研究以體外培養(yǎng)的仔豬睪丸SCs為研究材料，用TNF-α處理培養(yǎng)的SCs，采用CCK-8細胞增殖檢測試劑盒檢測TNF-α對SCs增殖的影響，利用流式細胞術檢測TNF-α對SCs周期進程的變化和細胞早期凋亡

3、的影響;用Western blot和熒光定量PCR技術檢測Fas/FasL、MMP-2/MMP-9和TIMP-2/TIMP-1蛋白水平及其mRNA豐度表達的變化;然后利用ELISA試劑盒檢測TNF-α對IL-1β、IL-6、IGF-1、TGF-β1等細胞因子表達的影響。
　　實驗結果發(fā)現(xiàn):
　　(1)用不同濃度的TNF-α(0.1、1、10、25、50、100、200ng/mL)處理SCs不同時間(6、12、24、36、48

4、、72h)后，SCs的增殖活力具有濃度和時間依賴性，其作用效果在濃度為50ng/mL、作用時間為36h時最強，細胞的增殖活力最低，極顯著抑制了SCs的增殖，促進了細胞的凋亡(P＜0.01);
　　(2) TNF-α（50ng/mL）顯著促進了Fas/FasL蛋白水平及mRNA的表達(P＜0.01);
　　(3) TNF-α(50ng/mL)顯著促進了MMP-2/MMP-9蛋白和mRNA的表達(P＜0.05);
　　(4

5、) TNF-α（1ng/mL）顯著促進TIMP-1mRNA的表達(P＜0.01)，TNF-α（50ng/mL）極顯著降低TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表達(P＜0.01);
　　(5) TNF-α（50ng/mL）促進了IL-1β和IL-6和分泌，抑制了IGF-1和TGF-β1的分泌(P＜0.05)。
　　總之，TNF-α通過促進細胞促炎性因子IL-1β、IL-6的分泌，抑制TIMP-1和TIMP-2的表達，增強MM