幽門螺桿菌ggt基因的表達及對細胞的影響.pdf

1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文幽門螺桿菌ggt基因的表達及對細胞的影響姓名：孔梅申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：張尤歷20100610江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文D N A 轉(zhuǎn)染家蠶細胞B m N ，獲得了重組病毒，即g g t 全長( B m N P V - g g t ) 、去信號肽( B m N P V - d 3 0 a ) ，去N 端8 0 a a ( B m N P V - d 8 0 a ) ，去N 端3 8 0 a a( B m

2、N P V - d 3 8 0 a ) 及與g f p 融合表達的B m N P V - g g t ．g 邱，B m N P V - d 3 0 a - g f p ，B m N P V - d 8 0 a ．g f p 和B m N P V - d 3 8 0 a —g f p 等重組病毒，對插入的片段進行驗證，表明病毒攜帶了上述片段。( 2 ) g g t 各片段表達產(chǎn)物的活性與細胞定位：將各種病毒感染的細胞收集后，分析表達產(chǎn)物的

3、G G T 活性。結(jié)果表明，4 種感染了含不同長度g g t 病毒的細胞液均能檢測到活性，其中B m N P V - g g t ·a l l ，B m N P V - g g t ·d 3 0 a ，B m N P V - g g t - d 8 0 a ，B m N P V - g g t - d 3 8 0 a的活性分別為3 ．6 1 ，1 0 ．5 0 ，l O ．0 3 和1 0 ．8 8U ／L ，而陰性

4、對照B m P a k 6的活性為O ．0 6 U ／L 。說明病毒表達的g g t 各片段均有活性，其活性中心主要集中在C 端。經(jīng)w e s t e r n ．b l o t 證實了H p 的g g t 各片段與g f p 融合表達。融合片段在細胞中的定位表明，g g t 產(chǎn)物主要定位在胞質(zhì)中，當N 端大部分去除后，表達產(chǎn)物出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。( 3 ) g g t 表達產(chǎn)物對細胞的凋亡作用：通過J C ．1 染色分析，g g t 表達產(chǎn)物

5、可引起細胞線粒體膜電位變化，說明該類表達產(chǎn)物通過線粒體途徑介導(dǎo)細胞凋亡。全長g g t 誘導(dǎo)的S f 2 1細胞的凋亡作用很明顯，并且C 端融合其他片段也不影響這種作用。( 4 ) g g t 表達產(chǎn)物抑制胃癌細胞B G C ．8 2 3 的生長：采用M T T 法檢測g g t 表達產(chǎn)物對胃癌細胞B G C ．8 2 3 生長影響的結(jié)果說明，只有全長g g t 具有明顯的抑制腫瘤細胞生長的作用，而這種作用只在刺激的初期明顯，隨時間的延