核酸適體探針對血液腫瘤細胞的識別及其穩(wěn)定性研究.pdf

1、血液腫瘤是威脅人類健康的常見惡性腫瘤之一。對血液腫瘤細胞的準確分型，有利于實現(xiàn)血液腫瘤的早期診斷和治療并提高血液腫瘤的治愈率?；赟ELEX技術篩選的核酸適體探針不僅具有類似于抗體的高親和力和高特異性，在許多方面更優(yōu)于抗體，有望作為一種新型的“診斷抗體”，應用于血液腫瘤的診斷與治療。本論文瞄準這一前沿研究方向，圍繞基于細胞-SELEX技術篩選的核酸適體探針對血液腫瘤細胞的識別及其在血液中的穩(wěn)定性研究，開展了以下三個方面工作： 1

2、、基于細胞-SELEX技術篩選的核酸適體探針對不同環(huán)境中惡性淋巴瘤細胞的識別研究 采用流式細胞術，系統(tǒng)地考察了基于細胞-SELEX技術篩選的用于特異性識別惡性淋巴瘤Ramos細胞的核酸適體探針TD05對置于不同環(huán)境中的體外培養(yǎng)Ramos細胞和原代培養(yǎng)Ramos細胞的識別效果，并與針對Ramos細胞細胞膜表面抗原的特異性抗體CD19識別Ramos細胞的情況進行比較。結果表明：TD05能有效識別置于不同環(huán)境中不同來源的Ramos細胞

3、，顯示出優(yōu)越的反應條件適應性。它有望作為一種新型“診斷抗體”，在血液腫瘤的早期診斷與臨床檢測中發(fā)揮重要作用。 2、基于細胞-SELEX技術篩選的核酸適體探針血液穩(wěn)定性研究 分別采用20％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和流式細胞術，對核酸適體探針TD05在血液中的穩(wěn)定性進行了考察。在不影響核酸適體探針識別腫瘤細胞的親和力和特異性的前提下，通過反轉T堿基和鎖核酸這兩種化學修飾方法分別對TD05進行修飾，并對修飾后的TD05的血液穩(wěn)定

4、性進行了考察。在此基礎上，采用流式細胞術檢測了修飾后的TD05對腫瘤細胞的親和力和特異性的變化。結果表明：反轉T堿基和鎖核酸的修飾能有效提高TD05的血液穩(wěn)定性，使TD05的半衰期從0.5小時延長至3小時以上，并且不影響其識別Ramos細胞的親和力和特異性，為進一步實現(xiàn)核酸適體探針TD05在活體檢測中的應用提供了技術支持。 3、基于細胞-SELEX技術篩選的核酸適體探針識別構型的初步探討 通過對基于細胞-SELEX技術篩

5、選的用于特異性識別急性白血病細胞的核酸適體探針sgc8c分別進行熒光淬滅、熒光共振能量轉移標記以及PEG和互補序列修飾，通過采用流式細胞術對經修飾的sgc8c識別急性白血病CCRF-CEM細胞的情況考察，對sgc8c識別細胞時所形成的三維構型進行了初步探討。結果表明：sgc8c在識別CCRF-CEM細胞時，其5'端和3'端很可能形成雜交，且此雜交部分對識別CCRF-CEM細胞起著十分重要的作用。這些結果的獲得為進一步實現(xiàn)核酸適體探針sg