硫化氫在P38MAPK信號(hào)通路對(duì)肝纖維化影響中的作用.pdf

1、目的：
　　觀(guān)察硫化氫供體硫氫化鈉及P38MAPK信號(hào)通路特異性抑制劑SB203580對(duì)肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)及膠原沉積的影響，探討硫化氫與P38MAPK信號(hào)通路的關(guān)系，進(jìn)一步了解硫化氫對(duì)肝纖維化作用的分子機(jī)制。
　　方法：
　　采用40％四氯化碳棉籽油背部皮下注射聯(lián)合高脂肪高膽固醇飼料及酒精的復(fù)合因素法建立肝纖維化大鼠模型。肝纖維化模型大鼠于建模成功后分為5組：肝纖維化組(HF組)、DMSO溶劑對(duì)照組(D組)、硫氫

2、化鈉組(S組)、SB203580組(SB組)、SB203580+硫氫化鈉組(SB+S組)，分別腹腔注射生理鹽水、2‰DMSO溶液、SB203580溶液(0.3mg/kg·d)、硫氫化鈉溶液(56μmol/kg·d)、SB203580溶液+硫氫化鈉溶液(0.3mg/kg·d、56μmol/kg·d)進(jìn)行干預(yù)，共4次。各組大鼠均于干預(yù)結(jié)束后次日處死并留取肝臟。經(jīng)HE染色觀(guān)察肝組織纖維化分期，Masson染色計(jì)算用于評(píng)估肝組織內(nèi)膠原沉積的SS

3、S評(píng)分，免疫組織化學(xué)染色觀(guān)察肝組織I、III型膠原蛋白的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)肝組織內(nèi)I、III型膠原mRNA表達(dá)水平，Western blot法檢測(cè)肝組織內(nèi)P38MAPK、Caspase-3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　(1)HE染色見(jiàn)肝纖維模型組肝臟內(nèi)小葉結(jié)構(gòu)紊亂，纖維結(jié)締組織增生、假小葉形成，肝細(xì)胞變性壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯。(2) HE染色觀(guān)察肝纖維化分期，HF組、D組肝纖維分期較N組顯著升高，S組、SB組、SB+

4、S組肝纖維化分期分別較HF組、D組下降，SB組、S組間無(wú)明顯差異，SB+S組肝纖維化分期較SB組、S組下降。(3) Masson評(píng)價(jià)肝組織SSS評(píng)分，HF組、D組SSS評(píng)分較N組顯著升高，S組、SB組、SB+S組SSS評(píng)分分別較HF組、D組降低，SB+S組SSS評(píng)分比S組、SB組低，S組SSS評(píng)分較SB組無(wú)差異。(4)免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR法檢測(cè)肝組織I、III型膠原蛋白及其mRNA的表達(dá)，HF組、D組I、III型膠原蛋白及其m

5、RNA表達(dá)較N組顯著增加，S組、SB組、SB+S組I、III型膠原蛋白及其mRNA分別較HF組、D組減少，SB+S組I、III型膠原蛋白及其mRNA表達(dá)比S組、SB組少，但S組I、III型膠原蛋白及其mRNA較SB組無(wú)差異。(5)Western-blot結(jié)果示： N組、HF組、D組、S組的P38MAPK蛋白表達(dá)無(wú)差異，SB組P38MAPK蛋白的表達(dá)較HF組減少，SB+S組P38MAPK蛋白表達(dá)較SB組增多；HF組caspase-3蛋白表