大鼠腦缺血再灌注后HSP20和Bcl-2的表達及丹紅注射液干預的影響.pdf

1、目的：
　　 檢測SD大鼠腦缺血再灌注中小熱休克蛋白20(heatshockproteinHSP20)、B細胞淋巴瘤/白血病-2(Bcelllymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)在腦組織中的動態(tài)變化，分析二者之間可能的關系，探討其在腦缺血再灌注中的作用。研究丹紅注射液對SD大鼠腦缺血再灌注中HSP20、Bcl-2的影響，闡明丹紅注射液可能的機制。
　　 方法：
　　 將250g-320g雄性健康SD大

2、鼠60只，隨機劃分成四組：正常對照組(normalgroup)(n=10)，假手術組(sham-operatedgroup)(n=10)和腦缺血再灌注組(I/Rgroup)(n=20)，丹紅注射液藥物干預組(n=20)。應用Longa法建立SD大鼠大腦中動脈缺血兩小時再灌注模型，其中IR組和藥物干預組又分為四個亞組，每個亞組5只動物，分別是：6小時組、1天組、3天組、7天組。按Bederson1的5級評分法來評價手術后SD大鼠的神經(jīng)功能

3、缺損。應用HE染色法觀察大鼠腦組織病理學變化情況；應用免疫組織化學法來檢測Bcl-2、HSP20的陽性細胞表達水平的動態(tài)變化；應用實時熒光定量PCR方法對標本中HSP20mRNA的表達及擴增倍數(shù)進行測定。
　　 結果：
　　 1.HE染色：假手術組和正常對照組可見SD大鼠腦組織中神經(jīng)元結構及形態(tài)正常、無間質(zhì)水腫、沒有明顯的梗塞灶。腦缺血再灌注組可見神經(jīng)元細胞壞死產(chǎn)生，隨著時間的推移病灶側神經(jīng)元壞死變性現(xiàn)象加重并伴有膠質(zhì)細

4、胞增生。而在藥物干預組和IR組各個相同時間點的亞組相比較，可以看出藥物干預組大鼠腦組織損傷程度明顯輕于缺血再灌注組。
　　 2.免疫組織化學結果：(1)HSP20在假手術組和正常組的個時間點偶見陽性細胞，兩組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在腦缺血再灌注6h組中HSP20的表達有所升高，3d時到達高峰，之后呈逐漸下降趨勢，7d組陽性細胞數(shù)較3d組也有明顯減少，但仍高于假手術組和正常組。表達主要位于海馬區(qū)的神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞胞

5、漿中及血管內(nèi)皮細胞。IR組與假手術組及正常對照組比較HSP20的表達有差異，其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；(2)Bcl-2在假手術組和正常組中偶可見陽性細胞，兩組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Bcl-2在腦缺血再灌注6h組中表達開始升高，并迅速升高在1d時達到高峰，之后隨著時間的推移逐漸下降，7d組陽性細胞數(shù)較3d組也有明顯減少，但依然比假手術組及正常組高；Bcl-2陽性細胞數(shù)在IR組與假手術組的比較中有差異，且其差異有統(tǒng)計學

6、意義(P<0.01)；(3)丹紅藥物干預組中，HSP20的表達趨勢與IR組基本相同，但陽性細胞數(shù)明顯高于IR組，且其差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。丹紅藥物干預組與腦缺血再灌注組中Bcl-2的表達趨勢基本相同，但陽性細胞數(shù)卻明顯高于IR組，并且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.RT-PCR檢測結果：在腦缺血再灌注組中HSP20mRNA在6h時開始升高，3d時達到最高，之后逐漸降低但7d組仍高于正常對照組及假手術組，