活動性肺結(jié)核患者外周血中分泌IL-22的淋巴細胞亞群的探討.pdf

1、研究背景：IL-22是在2000年報道發(fā)現(xiàn)的一種炎性細胞因子，可由多種免疫細胞和組織分泌，對于炎癥性疾病和自身免疫性疾病的發(fā)生具有重要的調(diào)節(jié)作用。雖然近年發(fā)現(xiàn)的Th17細胞以分泌IL-17和IL-22等細胞因子為特征，參與了多種炎癥性疾病和自身免疫病的發(fā)生發(fā)展,但新近又有報道，以分泌IL-22為主要特征的Th22細胞在機體感染病毒或細菌等病原體后，可以激活其他免疫細胞，并且?guī)椭鷻C體控制炎癥對抗感染。本室近期研究工作發(fā)現(xiàn)，在結(jié)核病（TB）

2、患者外周血中分泌IL-17的γδT細胞亞群的比例升高，但在抗TB感染免疫中的作用并不十分清楚；另外，在TB患者外周血中是否也存在分泌IL-22的γδ T細胞，是否也在抗TB感染免疫中發(fā)揮作用以及與γδT17細胞的關(guān)系等均有待探討。
　　目的：檢測不同淋巴細胞亞群中 IL-22產(chǎn)生細胞的分布，探討 TB患者和健康人（HD）外周血中分泌IL-22和IL-17的αβT細胞、γδT細胞、B細胞及NK細胞等淋巴細胞亞群比例的變化，以及結(jié)核桿

3、菌（M.tb）耐熱抗原（Mtb-HAg）體外活化擴增的γδT（Mtb-AT）分泌 IL-22的情況，以探討不同淋巴細胞亞群在抗 M.tb感染免疫應答和TB發(fā)病機制中的作用。
　　方法：1.采集22例活動性肺結(jié)核病人和18例HD外周血，加入佛波醇酯（PMA）和鈣離子霉素（Ionomycin）刺激培養(yǎng)2小時后，再加入莫能霉素（Monensin）繼續(xù)培養(yǎng)4小時，收集細胞，加入熒光標記單抗體進行表面分子和胞內(nèi)染色，流式細胞儀檢測分泌IL-

4、22和分泌IL-17的淋巴細胞亞群的比例。2.采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞（PBMC），加入Mtb-HAg和rIL-2刺激培養(yǎng)7-10天后，使其成為富含效應性γδ T細胞的Mtb-Hag激活的T細胞（MTb-AT），收集細胞用PMA/Ionomycin和Monensin以及Mtb-HAg和Monensin刺激培養(yǎng)6小時，用流式細胞儀檢測分泌IL-22的γδT細胞亞群的比例。3.采用同一個體的全血和PBMC同時用流式細胞術(shù)檢測細

5、胞因子法檢測兩種標本中分泌 IL-22的細胞比例。4.采用同一個體的全血和PBMC同時用PMA/Ionomycin刺激培養(yǎng)6小時，收集細胞培養(yǎng)上清用ELISA檢測IL-22和IL17的含量；采用ELISA檢測TB和HD外周血漿中IL-22和IL-17的含量。5.從HD和TB外周血分離獲取PBMC后，用RT-PCR的方法檢測IL-22 mRNA的表達。
　　結(jié)果：1. IL-22分泌細胞僅占人外周血淋巴細胞的一小部分，TB病人和HD

6、分別為3.16％和2.69%；且主要由CD3+T細胞產(chǎn)生，在TB(n=22)病人和HD(n=18)分別為54.56%和64.10%。
　　2.分泌IL-22的淋巴細胞中，γδT細胞所占的比例在TB病人（6.45%，n=22）明顯的高于 HD（2.73%，n=18，P﹤0.05)；其它各淋巴細胞亞群所占比例在 TB病人和HD之間未見差別。
　　3.在CD3 T細胞、CD4 T細胞、CD8 T細胞、γδT細胞、NK細胞、B細胞中

7、分泌IL-22的細胞比例，在TB患者(n=22)分別為1.24%、1.58%、0.66%、7.37%、4.13%和0.54%；在HD(n=18)分別為1.83%、2.12%、0.67%、1.81%、1.96%和1.09%，分泌IL-22的γδT細胞在TB患者明顯高于HD（P﹤0.05）。
　　4.在各T細胞亞群中，均可以檢測到共表達IL-22和IL-17的陽性細胞；在TB患者中，IL-22+IL-17-細胞百分比為1.87%，Th

8、17細胞為3.78%；在 HD中， IL-22+IL-17-細胞的百分比為2.10%，Th17細胞為3.65%；Th22細胞和 Th17細胞在HD(n=8)和TB(n=15)兩者之間沒有差別。
　　5.分泌IL-22的γδT細胞在Mtb-HAg活化擴增的γδT細胞（Mtb-AT）中的比例在TB患者（0.75%，n=3）與HD（1.41%，n=5）之間比較沒有差別。
　　6.無論TB患者還是HD，用Mtb-HAg再刺激的Mtb

9、-AT中分泌IL-22的γδT細胞的比例與單加Monensin未刺激組相比均沒有差別（對TB，0.19%VS0.40%， n=3；對HD，1.16%VS0.62%，n=5，p>0.05）。
　　7.在全血標本中檢測到的分泌IL-22的各T細胞亞群的比例均明顯高于在PBMC中的檢出比例；全血中分泌IL-22的NK細胞和B細胞比例則明顯低于在PBMC中的檢出比例。
　　8. ELISA法檢測的IL-22和IL-17在全血培養(yǎng)上清

10、中的濃度均明顯高于在PBMC培養(yǎng)上清中的濃度；TB患者外周血漿IL-22和IL-17的濃度均明顯高于HD。
　　9. TB患者外周血IL-22的mRNA表達明顯高于HD。
　　結(jié)論：
　　1.人類外周血淋巴細胞中T細胞是分泌IL-22的最主要來源，其中CD4+T細胞又是分泌IL-22的主要來源之一。
　　2. TB患者外周血中分泌IL-22的γδT細胞增多，并且分泌IL-22的γδT細胞比例增高并非與分泌IL-1

11、7的γδT細胞比例增高引起有關(guān)。
　　3. TB患者外周血中Th17和Th22細胞比例與HD相比沒有顯著性差異。
　　4. Mtb-HAg可特異性誘導γδT細胞分泌IFN-γ，而不能誘導分泌IL-22。
　　5.在全血標本中檢測到的分泌 IL-22的T細胞亞群的比例均明顯的高于其在PBMC中的檢出比例，在全血標本中檢測到的分泌IL-22的NK細胞和B細胞比例則明顯低于在PBMC中的檢出比例。
　　6. TB患者外