莫諾苷對局灶性腦缺血治療時間窗的實驗研究.pdf

1、局灶性腦缺血導致?lián)p傷的機制非常復雜，目前臨床上除溶栓治療外還沒有有效的治療方法，唯一被批準用于治療中風藥物組織型纖溶酶原激活物（tPA）的治療時間窗僅為4.5h，因此亟需根據(jù)藥物特異的治療靶點和有效治療時間窗發(fā)展新的療法，減輕腦缺血造成的損傷。腦損傷后Wnt信號通路會被激活，而Wnt信號通路能夠促進細胞增殖，對神經(jīng)發(fā)生和血管新生有調(diào)控作用。莫諾苷具有抗炎、抗氧化作用，能夠有效促進側(cè)腦室室管膜下區(qū)（SVZ）的神經(jīng)發(fā)生，以及大腦皮層梗死灶周

2、圍區(qū)域內(nèi)血管密度增加。本文通過研究莫諾苷對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的有效治療時間窗的研究及Wnt信號通路在再灌注損傷后的時程變化，為臨床治療缺血性腦損傷以及開發(fā)神經(jīng)保護性藥物提供新的思路。
　　目的：探究莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠的有效治療時間窗及腦缺血后Wnt信號通路的時程變化。
　　方法：采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，栓塞30min后再灌注，術后隨機分為假手術組、模型組、莫諾苷30 mg·kg-1、

3、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量組，分別于缺血再灌注后1d、3d開始灌胃給藥7天。通過檢測神經(jīng)行為學評分、腦梗死體積以及神經(jīng)發(fā)生、血管發(fā)生相關蛋白的表達，來研究不同給藥時間莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠的治療作用。同時，采用該動物模型，Western Blotting法觀察術后3h、6h、12h、24h以及3d、7d、14d、28d Wnt信號通路Wnt3a和β-catenin蛋白的表達變化。
　　結(jié)果：
　

4、　1.神經(jīng)功能評分：Zea Longa評分結(jié)果顯示，MCAO造模8d和10d后，大鼠的行為學評分比假手術組顯著增加(P<0.001, P<0.001)。缺血再灌注后1d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較,莫諾苷270 mg·kg-1劑量組能顯著降低大鼠的神經(jīng)功能評分(P<0.01)；而缺血再灌注后3d開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，莫諾苷30 mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對大鼠的行為學無明顯改善作用。

5、r>　　2.腦梗死體積測定：MCAO造模8d和10d后，與假手術組相比，模型組的腦梗死體積顯著增加(P<0.001，P<0.001)。缺血再灌注后1d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較，莫諾苷270 mg·kg-1劑量組顯著減小大鼠的腦梗死體積(P<0.05)。缺血再灌注后3d開始連續(xù)給藥7d，與模型組比較，莫諾苷30 mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對大鼠的腦梗死體積無明顯改善作用。
　　3.神經(jīng)發(fā)生

6、相關因子表達的影響：MCAO造模8d后，與假手術組相比，模型組的Wnt3a和β-catenin表達都增加(P<0.05，P<0.05),造模10d后，與假手術組相比，模型組的Wnt3a和β-catenin表達也都增加(P<0.001，P<0.05)。缺血再灌注1d和3d后開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，缺血再灌注后1d給藥時，莫諾苷270 mg·kg-1劑量顯著增加Wnt3a和β-catenin的表達(P<0.01、P<0.01)；缺血

7、再灌注3d后給藥時，莫諾苷30mg·kg-1、90mg·kg-1、270mg·kg-1劑量對上述指標均無顯著增加作用。
　　4.血管發(fā)生相關因子表達的影響：MCAO造模8d后，與假手術組相比，模型組的CD34和Ang-1表達均增加(P<0.05，P<0.05),造模10d后，與假手術組相比，模型組的CD34和Ang-1表達也都增加(P<0.001，P<0.01)。缺血再灌注1d和3d后開始連續(xù)給藥7d，與模型組相比，缺血再灌注后1

8、d給藥時，莫諾苷270 mg·kg-1劑量顯著增加CD34和Ang-1的表達(P<0.05、P<0.01)，其中莫諾苷90 mg·kg-1就能顯著增加 Ang-1的表達(P<0.05)。缺血再灌注3d后給藥時，莫諾苷30mg·kg-1、90 mg·kg-1、270 mg·kg-1劑量對上述指標均無顯著增加作用。
　　5.Wnt信號通路時程變化：造模后Wnt3a和β-catenin的表達呈動態(tài)變化。Wnt3a從腦缺血后3h開始蛋白表

9、達增多，直至1d時達到表達高峰(P<0.001)，隨后在3d、7d、14d時雖有下降，但表達量水平仍顯著高于假手術水平（P<0.01、P<0.001、P<0.05)，14d與7d相比較時表達量下降（P<0.01），直至28d時表達無顯著性差異。β-catenin蛋白的表達在12h時降低（P<0.01），在1d、3d、7d、14d時表達均增多(P<0.001、P<0.001、P<0.001、P<0.05)，28d時與假手術相比無差異。