原蛋白轉變酶2基因上調對乳腺癌細胞增殖的影響.pdf

1、研究背景：
　　在《黃帝內經(jīng)·九針論篇》中,“四時八風之客于經(jīng)絡之中,為瘤病也”提出正氣不足六淫外邪停留經(jīng)絡而成瘤病的病機,乳腺腫瘤多因肝經(jīng)不通、正氣不足外邪侵襲所致。乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤,美國臨床醫(yī)師癌癥雜志公布的最新統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,美國2011年有230480例女性患乳腺癌,占女性新發(fā)惡性腫瘤30％。我國北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計顯示,乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫瘤,且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。近年的研究發(fā)現(xiàn)

2、,乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與內分泌肽直接相關。神經(jīng)內分泌肽是機體內分泌、旁分泌或自分泌等器官或活細胞分泌的活性多肽,這些多肽的成熟需要9種原蛋白轉變酶(Pro-protein Convertases,PCs)的互相協(xié)同作用,在時間和空間上加工神經(jīng)內分泌肽前體蛋白(原蛋白)在特定組織和細胞中的成熟。原蛋白轉變酶2基因(pc2)是細胞的正?；?PC2酶介導的加工體系在乳腺癌中呈現(xiàn)低水平,這種變化與腫瘤形成、發(fā)展和凋亡等密切相關。本研究通過上調pc

3、2基因表達,研究乳腺癌細胞的增殖狀態(tài)。
　　研究目的：
　　研究pc2基因上調對乳腺癌細胞增殖的影響,為乳腺癌的治療提供新的研究方向。
　　研究方法：
　　自大鼠垂體組織中提取RNA,經(jīng)過RT-PCR、重組載體轉化和篩選等手段,結合瓊脂糖凝膠電泳對重組的pc2和7b2基因進行鑒定。通過質粒抽提試劑盒(小量)和離子交換柱(大量),將重組的基因提取并純化。用脂質體介導的基因制劑,將基因導入癌細胞。用Western b

4、lot技術分析PC2蛋白的表達。通過MTT法和熒光免疫等體外實驗分析pc2基因對癌細胞增殖的作用。通過pc2基因制劑的Exvivo和Invivo小鼠體內實驗,評價癌細胞在體內的增殖。
　　研究結果：
　　本研究在成功構建重組pc2和7b2基因的基礎上,利用脂質體介導技術將pc2基因轉染進入癌細胞。Western blot的結果顯示,轉染了pc2和7b2基因的4T1細胞,其蛋白的表達量比野生型4T1細胞的表達量高。這說明了基因

5、成功轉染進入細胞中。MTT的體外抑制實驗結果顯示,隨著pc2和7b2基因轉染的量的增加,癌細胞的增殖受到抑制。在免疫熒光的實驗中,轉染了pc2和7b2基因的細胞其細胞核破碎,而野生型的細胞細胞核保持圓形。在小鼠體內注射轉染了基因的癌細胞后,對照組的7只老鼠都長了腫瘤,而pc2和7b2組的小鼠只有一只長出了腫瘤。對荷瘤小鼠體內進行基因治療時,pc2和7b2組的腫瘤其生長受到抑制,而對照組的腫瘤隨著時間的推移而增長。
　　結論：