利用基因捕獲技術建立穩(wěn)定的HBV感染細胞模型.pdf

1、目的和意義：將乙型肝炎病毒DNA整合到細胞基因組中，建立在體外穩(wěn)定表達HBV的細胞模型。為進一步研究相關基因對HBV復制的調節(jié)作用奠定基礎。方法：pGEM．I-IBVl 3質粒經HindlII限制性內切酶消化，將I-IBVl3全長DNA切下，與同樣經HindlII限制性內切酶降解過的PU2l連接，得到PU21一HBV重組質粒。將該重組質粒采用電擊轉染方法導入HepG2細胞中，G418篩選陽性克隆并以X-gal染色、PCR、RT-PCR、

2、Southem blot、ELISA等方法驗證HBV DNA的插入和表達。結果：PU21．HBV重組質粒經測序證明HBVl3全長DNA正確與PU21載體連接，該重組質粒轉染HepG2細胞后經G418篩選，得到一系列陽性克隆，Southern blot證實HepG2細胞基因組中含I-IBVDNA，RT-PCR結果表明HBV DNA在HepG2細胞中有功能基因的轉錄。結論：HBVl 3已被整合在HepG2細胞染色體中并能穩(wěn)定表達其RNA。穩(wěn)