鈣泊三醇對人角質(zhì)形成細胞S100A8表達的影響.pdf

1、學校代碼：10023學號：20060lOll鈣泊三醇對人角質(zhì)形成細胞S1ooA8表達的影響專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)2006級姓名：吳大維導師：晉紅中(教授)北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院(北京協(xié)和醫(yī)院)皮膚科完成日期：2014年6月摘要一研究背景及目的銀屑病是一類常見的慢性炎癥性皮膚病，皮膚角質(zhì)形成細胞的異常增殖和分化是銀屑病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。人體皮膚是維生素D的合成場所，維生素D及其類似物鈣泊三醇也可以作用于角質(zhì)形成細胞，調(diào)節(jié)細胞增

2、殖、分化和凋亡。同時在角質(zhì)形成細胞內(nèi)，抗菌肽S100A7、S100A8、S100A9可以與IL一17、IL_l、TNF—Q等炎癥因子相互促進，引起細胞異常增殖與分化，導致銀屑病發(fā)?。灰延醒芯孔C實維生素D可以通過拮抗S100A7表達減輕皮膚炎癥反應，從而治療銀屑病?；诖耍S生素D及其類似物是否可能通過影響角質(zhì)形成細胞S100A8的表達而參與銀屑病的病理生理過程本課題以體外培養(yǎng)的永生化人角質(zhì)形成細胞HaCaT細胞系為對象，通過實時定量PC

3、R的方法研究鈣泊三醇對細胞內(nèi)S100A8蛋白表達的影響。二研究方法(1)HaCaT細胞培養(yǎng)：使用含10％FBS及抗生素的她M—EBSS培養(yǎng)基常規(guī)體外培養(yǎng)HaCaT細胞并傳代。(2)TNF—Q與鈣泊三醇對HaCaT細胞的干預：最后一次傳代后細胞融合達80～90％時分為四組，空白對照組不加入任何藥物干預，TNF—Q組加入100ng／ⅢlTNF—Q，鈣泊三醇組加入10岣M～10叫M濃度梯度的鈣泊三醇，鈣泊三醇TNF—Q組在100ng／mlTN

4、F—Q的基礎上再加入101M～10嘲鈣泊三醇，上述細胞共同孵育24h。(3)HaCaT細胞內(nèi)S100A8表達水平檢測：細胞成分提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT—PCR方法擴增目的基因S100A8及內(nèi)參B—actin片段并行1％瓊脂糖凝膠電泳；使用同樣的cDNA及引物通過實時定量PCR的方法擴目的基因s100A8及內(nèi)參O—actin片段，用2。△‘法計算各樣本S100A8相對表達量，并用單因素方差分析的統(tǒng)計學方法比較各組間Sloo

5、A8表達的差異。三研究結果(1)S100A8擴增產(chǎn)物為長度250bp左右的單一片段，B—actin擴增產(chǎn)物為長度130bp左右的單一片段；(2)100ng／mlTNF一Ⅱ處理體外培養(yǎng)的HaCaT細胞24h后，S100A8表達較空白對照上調(diào)1962倍(尺001)；(3)101M、10州M鈣泊三醇處理細胞24h后，S100A8表達分別較空白對照上調(diào)5029、2848倍(尺O01)；(4)10咄M、10。6M及10叫M鈣泊三醇處理細胞24h后