利用AFLP分子標記技術對部分菊花品種遺傳多樣性的研究.pdf

1、菊花(DendranthemaXgrandiflorum(Kamat)Kitam)起源于中國，是我國十大傳統(tǒng)名花和世界四大鮮切花之一。菊花品種繁多，種下變異極為豐富，具有重要的經濟價值。中國栽培菊花大約有3000個品種，具有悠久的栽培歷史，株型、葉片、花色、花瓣(小花)形態(tài)等都有非常豐富的變化。如此眾多的品種和變異式樣給品種的分類、鑒定和品種權的保護帶來極大困難。AFLP(擴增片斷長度多態(tài)性)是一種新的DNA分子標記技術，具有豐富的多態(tài)

2、性、較好的穩(wěn)定性和較高的個體特異性，廣泛應用于品種鑒定、遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構建、基因定位等方面。本試驗在建立較穩(wěn)定的菊花AFLP技術體系基礎上，構建了26份菊花材料的圖譜，分析了其遺傳多樣性，以期為菊花品種鑒定、親緣關系分析、高密度遺傳圖譜構建、核心種質構建等奠定基礎。 本文采用改良常規(guī)CTAB法提取菊花基因組DNA。其提取液成份為：100mmol/LTris-HCL(pH 8.0)，20mmol/LEDTA，1.4 mo

3、l/LNaCl，2％CTAB，2％PVP<,40>，50 mmol/L β-巰基乙醇，粗提后的DNA經RNase除去RNA：苯酚/氯仿抽提一次，氯仿/異戊醇抽提一次，去除蛋白質，DNA降解少，無蛋白質和RNA，獲得了高質量的擴增模板。在此基礎上，得到清晰的菊花AFLP圖譜，從而建立了最佳的菊花AFLP反應體系。 利用AFLP分子標記技術研究26個菊花品種的遺傳多樣性，從64對引物中篩選出的7對AFLP選擇性引物對菊花種質資源進行

4、了AFLP分析，都得到了清晰的圖譜，表明這些引物用于菊花AFLP分析是可行的。7個引物組合共擴增出389條帶，其中多態(tài)性條帶294條，多態(tài)性占75.54％，平均每個引物組合擴出多態(tài)性條帶42.0條，每一個引物組合都可將26個品種完全分開。說明菊花存在豐富的遺傳變異，遺傳多樣性水平很高。 另一方面使用NTSYS2.0軟件，通過UPGMA法對所得的多態(tài)性標記進行聚類分析，獲得聚類樹狀圖，其相似系數(shù)為0.61～0.85之間，結果表明2