構(gòu)巢曲霉中Calcineurin及其相關(guān)蛋白對逆境響應(yīng)及形態(tài)建成調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)是屬于子囊菌門(Ascomycota)的一種絲狀真菌，其菌絲延伸是所有極性生長中速率最快的模式生物之一，因此是研究決定曲霉侵染性的極性生長和相關(guān)信號通路的良好模式生物。
　　已有研究表明鈣離子信號通路參與調(diào)節(jié)構(gòu)巢曲霉的極性生長和形態(tài)建成，然而關(guān)于鈣離子信號通路的核心調(diào)節(jié)者calcineurin在調(diào)節(jié)構(gòu)巢曲霉極性生長和形態(tài)建成方面的作用的認(rèn)識還很有限。本課題組之前的研究表明，在構(gòu)巢

2、曲霉中，NDR(nuclear Dbf2-related)信號通路的成員MobB和CotA在細(xì)胞極性的建立和維持過程中形成復(fù)合體發(fā)揮功能，它們之中任何一個缺失，都能夠?qū)е戮z極性生長的缺失和形態(tài)缺陷。進(jìn)一步研究表明，這種極性缺陷滲透逆境條件下可以恢復(fù)，然而這種逆境恢復(fù)過程依賴鈣信號通路。
　　在本文中，通過遺傳學(xué)及分子生物學(xué)方法我們進(jìn)一步證明：(1)鈣離子信號系統(tǒng)成員的基因表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平在在CotA/MobB缺陷菌株在滲透

3、逆境中恢復(fù)極性生長的過程表達(dá)量增高，說明鈣離子信號通路確實(shí)參與了逆境恢復(fù)的過程。其中鈣調(diào)磷酸酶calcineurin的作用尤其重要。不僅參與了逆境恢復(fù)過程的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，還能夠調(diào)控NDR通路中的CotA/MobB基因的表達(dá)量。(2)Calcineurin對基因表達(dá)的了解作用不僅僅是通過CrzA來完成的，即在逆境響應(yīng)過程中，CrzA不是calcineurin唯一的下游靶蛋白。(3)通過同源比對找到構(gòu)巢曲霉中預(yù)測的calcineurin相互作用

4、蛋白CdaA、FapA和AkrA：CdaA具有多糖去乙?；肝稽c(diǎn)，并具有N端信號肽及calcineurin結(jié)合位點(diǎn)，CdaA缺陷菌株對EGTA、Ca2+、NaCl和LiCl都沒有明顯的敏感性，但是CdaA/CnaA雙缺菌株在Ca2+產(chǎn)孢量相對于CnaA單缺菌株來說具有明顯的恢復(fù)；FapA具有NF-X1鋅指結(jié)構(gòu)，并具有DNA結(jié)合序列和N端信號肽，RT-PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)apA確實(shí)對鈣離子信號通路各組分基因表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，說明FapA為N

5、F-X1轉(zhuǎn)錄因子家族成員，F(xiàn)apA缺失菌株相對于野生型來說，對EGTA敏感，對NaCl的敏感性次之，對LiCl的敏感性與野生型相似；AkrA具有N端信號肽及跨膜序列，并具有棕櫚?；富钚?，AkrA缺失菌株對EGTA和LiCl超敏感，對NaCl敏感。(4)細(xì)胞壁合成抑制劑Calcoflour White和Congo Red對FapA缺失菌株和AkrA缺失菌株以及它們與CnaA的雙缺菌株具有不同的影響，且作用效果明顯，說明FapA、AkrA