腦啡肽能神經(jīng)元在吸入麻醉及應激中的疼痛調節(jié)機制研究.pdf

1、疼痛是困擾臨床工作者的臨床癥狀之一，但其機制并不明確。雖然很多研究都揭示許多中樞結構如皮層、下丘腦、導水管周圍灰質（periaqueductal grey,PAG）、延髓頭端腹內側區(qū)（rostral ventromedial medulla,RVM）、脊髓等和多種神經(jīng)遞質如腦啡肽（enkephalin,ENK）、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、去甲腎上腺素（norepinephrine,NE）、γ-氨基丁

2、酸（γ-aminobutyric acid,GABA）等及其相應受體都參與到疼痛的調控過程，但是對于ENK能神經(jīng)元在吸入麻醉和應激對疼痛調控中的作用機制仍不十分明確。
　　研究目的：
　　觀察七氟醚在吸入麻醉及強迫游泳應激條件下前腦啡肽原(preproenkephalin,PPE)-綠色熒光蛋白（green fluorescence protein,GFP）轉基因小鼠脊髓及PAG內Fos蛋白及ENK能神經(jīng)元的活化情況，并探討

3、其在疼痛調控過程中的作用機制。
　　研究方法：
　　疼痛是困擾臨床工作者的臨床癥狀之一，但其機制并不明確。雖然很多研究都揭示許多中樞結構如皮層、下丘腦、導水管周圍灰質（periaqueductal grey,PAG）、延髓頭端腹內側區(qū)（rostral ventromedial medulla,RVM）、脊髓等和多種神經(jīng)遞質如腦啡肽（enkephalin,ENK）、5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）

4、、去甲腎上腺素（norepinephrine,NE）、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）等及其相應受體都參與到疼痛的調控過程，但是對于ENK能神經(jīng)元在吸入麻醉和應激對疼痛調控中的作用機制仍不十分明確。
　　實驗一：PPE-GFP轉基因小鼠在吸入七氟醚處理后，進行福爾馬林實驗并檢測Fos蛋白在脊髓的分布，評價七氟醚對疼痛的調控作用。利用Fos與GFP免疫熒光雙重標記用來檢測ENK能神經(jīng)元在七氟醚處理后的

5、活化狀態(tài)，并用非選擇性阿片肽受體拮抗劑納絡酮觀察阻斷ENK作用后小鼠行為學的改變。鞘內注射七氟醚觀察行為學及ENK能神經(jīng)元的活化狀態(tài)，探討七氟醚在脊髓局部對疼痛的調控機制。
　　實驗二：PPE-GFP轉基因小鼠分別接受假游泳和強迫游泳處理，采用熱板測痛儀測定小鼠的熱痛閾值；應用免疫熒光染色技術檢測兩組小鼠PAG中Fos陽性神經(jīng)元、Fos/GFP雙標神經(jīng)元的分布特征及數(shù)量的變化。探討PAG內ENK能神經(jīng)元在應激調控疼痛中的作用。

6、r>　　研究結果：
　　實驗一：脊髓ENK能神經(jīng)元在七氟醚鎮(zhèn)痛調控中的作用
　　1.七氟醚均可以抑制福爾馬林誘發(fā)的雙相痛行為以及Fos蛋白在脊髓的表達，隨七氟醚的濃度增加其抑制作用明顯增強，呈濃度依賴關系。
　　2.小鼠吸入七氟醚后，ENK能神經(jīng)元與Fos蛋白具有共存關系，共存神經(jīng)元主要集中于脊髓的I～II層，而GFP的表達水平與氧氣處理組相比也明顯增加。納絡酮在一定程度上可反轉了七氟醚對痛行為的抑制作用。
　　

7、3.鞘內注射七氟醚可對福爾馬林引起的痛行為反應起到明顯的抑制作用，但其抑制作用并未被納絡酮所反轉，而在脊髓中未見到Fos蛋白與ENK能神經(jīng)元共存現(xiàn)象，GFP的水平也未見明顯變化。
　　實驗二：應激引起的鎮(zhèn)痛效應與腦啡肽能神經(jīng)元的關系
　　1.應激組小鼠在應激后10min，小鼠熱痛閾明顯升高到峰值，30min時逐漸下降，60min時降到應激前時的基礎值。
　　2.免疫熒光染色結果顯示：小鼠在應激后2h，PAG內Fos陽性

8、神經(jīng)元和Fos/GFP雙標神經(jīng)元明顯增多，主要集中于PAG腹外側區(qū)。
　　研究結論：
　　1.吸入七氟醚可對小鼠因福爾馬林引起的痛行為反應起抑制作用。這種抑制作用與阿片肽有一定的相關關系，并可被非選擇性阿片肽受體阻斷劑納絡酮所阻斷。脊髓中ENK能神經(jīng)元，在七氟醚抑痛效應中起到部分作用。但是，鞘內注射七氟醚可升高疼痛閾值，但與阿片肽系統(tǒng)并無密切關系，也不能影響到脊髓ENK能神經(jīng)元的狀態(tài)。因此，脊髓ENK能神經(jīng)元參與七氟醚抗傷害