FGF-1對人甲狀腺癌細胞中HMGA1表達的影響及其機制初步研究.pdf

1、目的：觀察 FGF-1對人甲狀腺癌細胞中 HMGA1表達的影響，并初步探討PI3K/AKT通路在FGF-1調(diào)控HMGA1表達過程中的作用。
　　方法：以體外培養(yǎng)的人甲狀腺癌細胞 SW-579為研究對象，分別以不同濃度的FGF-1處理SW-579細胞，應用RT-PCR、實時定量PCR、免疫熒光法檢測HMGA1 mRNA以及蛋白的表達。同時應用RT-PCR、實時定量PCR、免疫熒光法檢測以25ng/mL和35ng/mL FGF-1分別

2、處理人甲狀腺癌細胞后不同時間HMGA1 mRNA及蛋白的表達。應用熒光素酶報告系統(tǒng)分析 FGF-1對轉(zhuǎn)染入人甲狀腺癌細胞中HMGA1啟動子活性的影響。為了進一步研究 FGF-1調(diào)控人甲狀腺癌細胞HMGA1的機制，用PI3K/AKT通路抑制劑（LY294002和Wortmannin）處理細胞，應用RT-PCR和免疫熒光法檢測SW-579細胞經(jīng)FGF-1刺激后HMGA1 mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果：1）RT-PCR結(jié)果顯示：不同

3、濃度FGF-1處理甲狀腺癌細胞后，與對照組相比，15ng/mL、25ng/mL、35ng/mL FGF-1組甲狀腺癌細胞中HMGA1 mRNA均明顯升高(p<0.05)，而5ng/mL FGF-1組無明顯改變。FGF-1處理甲狀腺癌細胞不同時間后，與對照組相比，F(xiàn)GF-1處理3小時、6小時、9小時、12小時后甲狀腺癌細胞中HMGA1 mRNA均升高(p<0.05)，但各組之間的差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。PI3K抑制劑處理甲狀腺癌

4、細胞后，與對照組相比，F(xiàn)GF-1組HMGA1 mRNA水平升高(p<0.05)，與FGF-1組相比，PI3K通路抑制劑組甲狀腺癌細胞HMGA1 mRNA水平下降(p<0.05)。2）實時定量PCR顯示：不同濃度FGF-1處理甲狀腺癌細胞后，與對照組相比，25ng/mL、35ng/mL FGF-1組甲狀腺癌細胞中HMGA1 mRNA增加(p<0.05)，但5ng/mL、15ng/mLFGF-1組的升高無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。FGF-

5、1處理甲狀腺癌細胞不同時間后，與對照組相比，F(xiàn)GF-1處理甲狀腺癌細胞6小時、9小時、12小時后，其HMGA1 mRNA增加(p<0.05)，但組內(nèi)的差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。3）熒光素酶報告系統(tǒng)顯示：不同濃度FGF-1處理甲狀腺癌細胞后，與對照組相比，其 HMGA1啟動子活性在15ng/mL、25ng/mL、35ng/mL FGF-1組均升高(p<0.05)，各組內(nèi)的差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，而5ng/mL FGF-1

6、組HMGA1啟動子活性無明顯變化。FGF-1處理甲狀腺癌細胞不同時間后，與對照組相比，F(xiàn)GF-1處理6小時、9小時、12小時后甲狀腺癌細胞中HMGA1啟動子活性均升高(p<0.05)，且以9小時、12小時組升高最明顯(p<0.05)。4）免疫熒光結(jié)果顯示：不同濃度的FGF-1處理甲狀腺癌細胞后，熒光所標記的HMGA1蛋白主要分布在細胞核，與對照組相比，加入FGF-1后，甲狀腺癌細胞核中HMGA1蛋白均增加。FGF-1處理甲狀腺癌細胞不同

7、時間后，與對照組相比，F(xiàn)GF-1處理3小時、6小時、9小時、12小時后甲狀腺癌細胞核中HMGA1蛋白均增加。PI3K抑制劑處理甲狀腺癌細胞后，熒光所標記的HMGA1蛋白主要分布在細胞核，與空白組相比，F(xiàn)GF-1組甲狀腺癌細胞核的HMGA1蛋白增加，與FGF-1組相比，PI3K通路抑制劑組甲狀腺癌細胞核HMGA1蛋白明顯減少。
　　結(jié)論：1）FGF-1能上調(diào)人甲狀腺癌細胞中HMGA1 mRNA和蛋白水平。2） PI3K/AKT信號通