添加甘藍3號染色體片段的AT3-11等大白菜易位系篩選及鑒定.pdf

1、為創(chuàng)建大白菜—結球甘藍異源易位系，本研究以大白菜—結球甘藍3號單體異附加系(AA+C3)為試材，用60Co-γ射線對其植株進行輻射，對輻射前后植株進行自交和游離小孢子培養(yǎng)，并對獲得的自交后代和小孢子植株進行細胞學和InDel標記鑒定，從54個小孢子植株及46個自交后代中初步篩選出8個添加結球甘藍3號染色體片段的大白菜—結球甘藍易位系，為大白菜的遺傳與育種提供了基礎研究材料。主要研究結果如下:
　　1.對大白菜—結球甘藍3號單體異附

2、加系（AA+C3）進行游離小孢子培養(yǎng)，利用結球甘藍C02連鎖群（位于結球甘藍3號染色體）相對于大白菜的特異InDel標記對獲得的小孢子植株進行鑒定，從17個小孢子植株中篩選出1個具有結球甘藍特異條帶的植株?；ǚ勰讣毎麥p數(shù)分裂觀察結果顯示，該植株染色體數(shù)為20條，為添加結球甘藍3號染色體片段的大白菜—結球甘藍易位系，命名為AT3-11。通過對InDel標記的加密設計，明確了該植株中外源甘藍片段的大小為1.03 Mb。利用大白菜A基因組10

3、個連鎖群上均勻分布的100個InDel標記對其進行分子鑒定，初步確定了該易位系中甘藍染色體片段位于大白菜5號染色體上。
　　2.分別利用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射線對大白菜—結球甘藍3號單體異附加系進行植株輻射，并對輻射后的植株進行游離小孢子培養(yǎng)，利用結球甘藍C02連鎖群相對于大白菜的特異InDel標記對獲得的小孢子植株進行鑒定，從37個小孢子植株中篩選出8個具有結球甘藍C02連鎖群特異條帶的植株。其中，1個來自

4、30Gy輻射的植株，5個來自45Gy輻射的植株，2個來自60Gy輻射的植株。對8個具有甘藍特異條帶的植株進行減數(shù)分裂觀察，結果顯示這些植株中有4株染色體數(shù)為20條，初步確定這4株為添加結球甘藍3號染色體片段的大白菜—結球甘藍易位系，命名為AT3-24、AT3-45、AT3-47和AT3-54。
　　3.用30Gy、45Gy和60Gy的60Co-γ射線對大白菜—結球甘藍3號單體異附加系進行花粉輻射，并自交留種，對獲得的M1植株進行I

5、nDel標記鑒定，從46個M1植株中篩選出5個具有結球甘藍C02連鎖群特異條帶的植株，通過對其進行減數(shù)分裂觀察，明確了其中3個植株的染色體數(shù)為20條，初步確定其為大白菜—結球甘藍異源易位系，命名為AT3-4、AT3-23和AT3-39。對AT3-39后代進行InDel標記鑒定，22個M2植株中有17棵的擴增產物與結球甘藍親本相同，部分植株中無結球甘藍特異標記，表明AT3-39為雜合易位系植株。
　　4.以二倍體大白菜親本‘85-1