臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊柱關(guān)節(jié)炎患者受累關(guān)節(jié)局部白介素-23-Th17軸的抑制作用.pdf

1、第一部分，白介素-23/Th17軸在脊柱關(guān)節(jié)炎患者受累關(guān)節(jié)局部的異常表達(dá)
　　背景及目的:白介素-23(IL-23)是IL-12細(xì)胞因子家族的一個(gè)新的成員,主要由天然免疫細(xì)胞分泌。目前有研究報(bào)道HLA-B27誘發(fā)未折疊蛋白反應(yīng),上調(diào)IL-23的表達(dá)。IL-23與IL-23R結(jié)合,促進(jìn)Th17細(xì)胞的產(chǎn)生。IL-23/Th17軸參與多種慢性炎性疾病的發(fā)生,如銀屑病、炎性腸病等。本研究通過(guò)評(píng)估IL-23/Th17軸在脊柱關(guān)節(jié)炎(SpA)

2、患者受累關(guān)節(jié)局部的表達(dá),驗(yàn)證IL-23/Th17軸在SpA中的致病作用。
　　方法:(1)選取2012年9月至2013年1月中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院風(fēng)濕科門診接受關(guān)節(jié)腔穿刺抽液及注射藥物治療的SpA及膝骨關(guān)節(jié)炎(OA)患者;(2)無(wú)菌條件下抽取關(guān)節(jié)液,以密度梯度離心法分離關(guān)節(jié)液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞(SFMCs);(3)利用流式分選技術(shù)分選出CD14+單核細(xì)胞,在LPS(100ng/ml)刺激下體外培養(yǎng)24h;(4)SFMCs在PHA(1μg/m

3、l)刺激下體外培養(yǎng)72h;(5)細(xì)胞內(nèi)染色及流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD14+IL-23+及CD3+CD4+IL-17+(Th17)細(xì)胞比例,采用FlowJo軟件分析流式數(shù)據(jù);(6)應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩個(gè)樣本之間的比較采用Mann-Whitneyu檢驗(yàn)或t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料的比較采用Fisher確切概率法;相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析法,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)共納入22例SpA患者,男

4、性19例,女性3例,HLA-B27陽(yáng)性16例,陰性6例,年齡20~45(32.4±8.4)歲;病程5~96月,中位數(shù)病程27.0(6.8,60.0)月;6例OA患者,男性2例,女性4例,HLA-B27均為陰性,年齡46~67(58.3±7.9)歲;病程18~120月,中位數(shù)病程43.0(22.5,75.0)月;(2)SpA患者關(guān)節(jié)液CD14+IL-23+細(xì)胞比例為1.49％(1.18,1.87),Th17細(xì)胞比例為4.15%(3.15,

5、5.63),均分別高于OA患者關(guān)節(jié)液中CD14+IL-23+細(xì)胞比例[0.68%(0.48,1.11)]及Th17細(xì)胞比例[1.11%(0.81,1.69)],兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);(3)HLA-B27陽(yáng)性SpA患者關(guān)節(jié)液CD14+IL-23+細(xì)胞比例為1.60%(1.24,2.11),HLA-B27陰性SpA患者關(guān)節(jié)液中CD14+IL-23+細(xì)胞比例為1.26%(0.88,1.59),兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、>0.05);(4)SpA患者關(guān)節(jié)液CD14+IL-23+細(xì)胞比例與Th17細(xì)胞比例呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.67,P<0.01);但二者與患者的病程、ESR、CRP、BASDAI、BASFI、BASMI及VAS均無(wú)相關(guān)性。
　　結(jié)論:SpA患者關(guān)節(jié)液中表達(dá)IL-23的單核細(xì)胞及Th17細(xì)胞較OA患者明顯增多,且二者之間存在正相關(guān)關(guān)系,提示IL-23/Th17軸在SpA中具有致病作用。
　　第二部分，臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脊柱關(guān)

7、節(jié)炎患者受累關(guān)節(jié)局部白介素-23/Th17軸的體外抑制作用
　　背景及目的:間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是存在于正常人體多種組織中具有多向分化潛力的非造血干細(xì)胞,同時(shí)具有強(qiáng)大的抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用。近年MSCs已在多種慢性炎性及自身免疫性疾病的治療中顯示了一定的療效及安全性。SpA是一組以天然免疫反應(yīng)為驅(qū)動(dòng)的慢性炎性疾病,近年研究顯示IL-23/Th17軸在SpA的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。本研究通過(guò)觀察臍帶來(lái)源MSCs(UCMSCs)對(duì)Sp

8、A患者受累關(guān)節(jié)局部IL-23/Th17軸的抑制作用,為UCMSCs應(yīng)用于SpA的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:(1)選取2012年9月至2013年1月中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院風(fēng)濕科門診接受關(guān)節(jié)腔穿刺抽液及注射藥物治療的SpA患者;(2)無(wú)菌條件下抽取關(guān)節(jié)液,以密度梯度離心法分離SFMCs;(3)利用流式分選技術(shù)將SFMCs分為CD14+單核細(xì)胞和去CD14+-SFMCs兩部分;(4)SFMCs貼壁分選出單核細(xì)胞,與UCMSCs在L

9、PS(100ng/ml)刺激下共培養(yǎng)4h,利用流式分選技術(shù)分選出CD14+單核細(xì)胞,即CD14+單核細(xì)胞(UCMSCs預(yù)處理);(5)CD14+單核細(xì)胞在LPS(100ng/ml)刺激下單獨(dú)培養(yǎng)或與UCMSCs共培養(yǎng)24h,細(xì)胞內(nèi)染色和流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD14+IL-23+細(xì)胞比例,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-23的濃度;(6)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下單獨(dú)培養(yǎng),或分別與CD14+單核細(xì)胞(未處理)或CD1

10、4+單核細(xì)胞(UCMSCs預(yù)處理)共培養(yǎng)72h,細(xì)胞內(nèi)染色和流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17細(xì)胞比例;(7)在CD14+單核細(xì)胞存在或缺席下,去CD14+-SFMCs單獨(dú)培養(yǎng)或與UCMSCs共培養(yǎng)72h,細(xì)胞內(nèi)染色和流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17細(xì)胞比例;(8)應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;采用Wilcoxonsignedrank檢驗(yàn)進(jìn)行兩個(gè)配對(duì)樣本之間的比較,采用Friedman檢驗(yàn)進(jìn)行多個(gè)相關(guān)樣本比較;以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、>　　結(jié)果:(1)共納入9例SpA患者,男性7例,女性2例,HLA-B27陽(yáng)性8例,陰性1例,年齡21~44(31.1±8.3)歲;病程6~96(39.7±31.9)月;(2)SpA患者關(guān)節(jié)液CD14+單核細(xì)胞體外培養(yǎng)(LPS,100ng/ml)24h,CD14+IL-23+細(xì)胞比例為1.55%(1.32,2.61);UCMSCs與CD14+單核細(xì)胞直接接觸共培養(yǎng),CD14+IL-23+細(xì)胞比例下降至1.06%(0.80,1.81),兩

12、組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);CD14+單核細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng),上清中IL-23濃度為205.6pg/ml(182.8,256.7),與UCMSCs共培養(yǎng),上清中IL-23濃度為121.1pg/ml(111.1,195.0),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);(3)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下體外培養(yǎng)72h,Th17細(xì)胞比例為0.86%(0.22,0.94);培養(yǎng)體系中加入CD14+單核細(xì)胞(未

13、處理),Th17細(xì)胞比例升至2.71%(0.65,3.31);加入CD14+單核細(xì)胞(UCMSCs預(yù)處理),Th17細(xì)胞比例2.26%(0.40,2.66),三組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);(4)去CD14+-SFMCs在PHA(1μg/ml)刺激下單獨(dú)培養(yǎng)72h,Th17細(xì)胞比例為2.71%(1.80,3.05),UCMSCs共培養(yǎng)使Th17細(xì)胞比例降至1.59%(1.20,2.67),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.

14、01);CD14+單核細(xì)胞(未處理)與去CD14+-SFMCs混合后培養(yǎng)72h,Th17細(xì)胞比例為3.10%(2.81,5.49),UCMSCs共培養(yǎng)使Th17細(xì)胞比例降至2.20%(1.52,2.95),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);在CD14+單核細(xì)胞(未處理)存在下,UCMSCs對(duì)Th17的抑制率由18.0%(11.6,32.5)升至40.3%(25.8,51.6),兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。