翻白草和屬間藥用植物的ISSR分析及HPLC指紋圖譜分析.pdf

1、翻白草學名：Poterntilla discolor Bge，英文名：Discolor Cinquefoil Herb，薔薇科委陵菜屬多年生草本植物。具清熱解毒、消炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、降血糖等功能，在臨床上多以翻白草的水煎劑用作內服藥，如治療出血性疾病，阿米巴痢疾等；或者結合其它中藥水煎劑治療風濕麻木癱瘓、筋骨久痛、風癱、癲癇等。本文對翻白草的有效成分、藥理作用和臨床應用等方面的研究進行分析歸納，認為翻白草生物活性較高，療效確切，值得

2、進一步推廣應用，應進一步加強翻白草的基礎研究，研制現(xiàn)代中藥新劑型。 近年來翻白草的研究集中在其有效成分、藥理作用等方面，還未見在分子水平上的研究。本文從分子水平初步研究了翻白草種質資源及屬間藥用植物的親緣關系，同時建立了HPLC指紋圖譜，對黃酮類化合物進行分析。主要研究內容有以下幾個方面： 翻白草種子具有休眠特性，自然條件下發(fā)芽率不高。本文采用赤霉素、碳酸鈉、殼聚糖和低溫層積處理研究解除翻白草種子休眠、促進萌發(fā)、提高發(fā)芽

3、率的方法。 本文利用ISSR(inter-simpie sequence repeat)分子標記技術對翻白草同屬的6種藥用植物的親緣關系進行了研究和分析。首先對翻白草ISSR體系進行建立和優(yōu)化，確立了翻白草的ISSR-PCR的最佳體系。確立體系后，根據(jù)ISSR擴增結果發(fā)現(xiàn)了這種親緣關系與地域分布有一定關系，從分子水平將供試材料區(qū)分開來，為DNA指紋圖譜的建立奠定基礎。同時對12份不同地區(qū)的翻白草種質進行了基因組DNA多態(tài)性分析。

4、從50條引物中篩選出12條多態(tài)性引物用于PCR擴增，共擴增出128條DNA條帶，其中多態(tài)性DNA條帶104條，占總條帶數(shù)的81.25％。根據(jù)ISSR擴增結果，利用POPGENEL.32軟件計算了Nei’s基因距離，并用MEGA3.1軟件通過UPMGA法進行了聚類分析。結果表明：翻白草種質資源具有較豐富的遺傳多樣性；ISSR技術可將12份供試的翻白草材料全部分開，根據(jù)ISSR遺傳距離系數(shù)劃分的類群與地理位置分布有一定關系。 高效液

5、相色譜(HPLC)是建立中藥指紋圖譜的一種重要方法。本文建立了翻白草及屬間兩種藥用植物黃酮類化合物的HPLC指紋圖譜。色譜條件為：色譜柱為Atlantis C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為甲醇：水：40：60，流速為1.0mL/min，柱溫為25℃，檢測波長：368nm，進樣量2μL。結果檢測出10個分離度良好的共有指紋峰，計算了共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果表明該方法可作為科學評價及有效控制中藥質量的可行的定