小麥蛋白Alcalase水解物中免疫活性肽的研究.pdf

1、免疫活性肽能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力，刺激機(jī)體淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，提高機(jī)體抵御外界病原體感染的能力，降低機(jī)體發(fā)病率，抗腫瘤等重要的生理活性，是一種重要的生物活性肽。課題選用Alcalase對(duì)小麥蛋白進(jìn)行酶解，經(jīng)測(cè)定其具有刺激淋巴細(xì)胞增殖的免疫活性，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步分離純化得到最高活性的組分。論文主要研究結(jié)論如下： 目前已報(bào)道的140余種免疫活性肽其相對(duì)分子質(zhì)量都較小，通常在肽鏈中含有堿性氨基酸或在末端具有疏水性氨基酸。實(shí)驗(yàn)選用

2、Alcalase水解小麥蛋白，研究Alcalase水解小麥蛋白生產(chǎn)小麥肽的工藝條件，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)確定最佳條件為：酶用量13×103u/g樣品，pH值9.5，溫度60℃，底物濃度4％，反應(yīng)時(shí)間100min;此時(shí)水解度為18.63％。測(cè)定水解物中小麥肽的相對(duì)分子質(zhì)量大約分布在147Da～1548Da之間，其中相對(duì)分子質(zhì)量小于600Da的占56.12％，相對(duì)分子質(zhì)量小于2000Da的占74.18％。 采用DA201-C大孔吸附

3、樹脂對(duì)小麥蛋白水解物進(jìn)行脫鹽處理，脫鹽條件為50mg/mL的小麥蛋白水解物以0.5BV/h的流速上樣、以1BV/h的流速用去離子水洗滌、1BV/h的流速用75％乙醇解析，DA201-C大孔吸附樹脂對(duì)小麥蛋白水解物的脫鹽率為91.26％。通過(guò)體外淋巴細(xì)胞增殖法(MTT法)測(cè)得脫鹽后的混合物對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖具有一定的免疫刺激作用，當(dāng)添加量為150μg和200μg時(shí)差異顯著(P＜0.05)。 根據(jù)免疫活性肽通常含有堿性氨基酸這一性

4、質(zhì)，首先采用732陽(yáng)離子交換樹脂依據(jù)電荷對(duì)小麥蛋白Alcalase水解物進(jìn)行分離，小鼠體外脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示在pH8和pH10洗脫下來(lái)的組分B和C具有較高的免疫活性，SephadexG-15對(duì)組分B和C進(jìn)一步分離，C3與對(duì)照組相比脾淋巴細(xì)胞增殖最顯著，半制備RP-HPLC分離組分C3得到十二個(gè)組分，其中C3-11活性最高。液質(zhì)聯(lián)用分析C3-11得到兩個(gè)單一組分，預(yù)測(cè)主要組分的相對(duì)分子質(zhì)量617.2，氨基酸結(jié)構(gòu)為His-Cys-P