聯(lián)合應用重組人粒細胞集落刺激因子和重組人促紅細胞生成素對新生鼠缺氧缺血性腦病神經(jīng)保護作用的研究.pdf

1、目的：本研究首先成功建立新生SD大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，聯(lián)合及分別給予重組人粒細胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF）和重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin，rh-EPO)干預，觀察各個組SD大鼠在不同時間點運

2、動行為學變化、腦組織HE染色的病理改變、腦組織細胞凋亡，外周血細胞變化，探討聯(lián)合應用rhG-CSF和rh-EPO發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
　　方法：7日齡SD大鼠160只，雌雄不限，體重12~18g，隨機分為五組：假手術組，HIBD模型組，rh-EPO治療組，rhG-CSF治療組，rh-EPO、rhG-CSF聯(lián)合應用治療組，每組均為32只。HIBD模型組、rh-EPO治療組、rhG-CSF治療組及聯(lián)合應用治療組，均先制備HIBD模型：先

3、雙重結扎大鼠左側頸總動脈，從中間剪段，然后置于含8％O2和92%N2的低氧環(huán)境中，放置2h制備而成，即改良Rice法，治療組在HIBD后即刻（分別或聯(lián)合）給予rh-EPO（5000 U/kg）腹腔注射，每日一次，連續(xù)五天，rhG-CSF（60μg/kg）頸部皮下注射，每日一次，連續(xù)五天；五組根據(jù)大鼠處死時間不同，分為4個亞組即6h組、24h組、72h組、7d組，每亞組均為8只。不同時間點觀察各組運動行為學變化，腦組織病理變化，腦組織細胞

4、凋亡及檢測外周血細胞變化，所檢測的數(shù)據(jù)結果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：（1）行為：7日齡SD大鼠在模型制成后均出現(xiàn)不同程度的行為異常。（2）腦組織外觀：假手術組腦組織均正常，無水腫及缺血壞死等改變；模型組外觀各時間點可出現(xiàn)不同程度的水腫、萎縮及液化壞死，rh-EPO、rhG-CSF分別治療組各時間點腦組織輕度的水腫、萎縮等改變，無明顯的液化壞死，而聯(lián)合治療組各時間點腦組織外觀基本正常。（3）HE染色：①

5、假手術組：在不同的時間點腦組織結構清楚、細胞無水腫及壞死；②HIBD模型組：在建模后6h出現(xiàn)細胞間隙增大，腦組織細胞可出現(xiàn)水腫、變性等病理改變；24h細胞間隙進一步增大，腦組織細胞出現(xiàn)不同程度的變形、壞死，神經(jīng)細胞核出現(xiàn)溶解；72h細胞間隙顯著增大，壞死細胞數(shù)目明顯增多；7d時細胞排列比較紊亂，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，膠質細胞明顯增生；③rhG-CSF、rh-EPO分別治療組比相應的HIBD模型組各個時間點病理變化減輕：早期細胞水腫、變性好

6、轉，中后期細胞壞死較減少，膠質細胞增生減少。④聯(lián)合治療組比相應的分別治療組各個時間點病理變化明顯好轉，細胞排列規(guī)則，膠質細胞增生不明顯，無明顯的液化灶。（4）TUNEL法檢測腦細胞凋亡：HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應用組與假手術組比較，HIBD組及治療組在相對應的每個時間點腦組織細胞凋亡數(shù)目顯著升高（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義。聯(lián)合應用組與rhG-CSF、rh-EPO分別治療組各個相應時間點比較腦細胞凋亡數(shù)顯

7、著降低（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義；而rhG-CSF組與rh-EPO組之間各個相應時間點比較腦細胞凋亡數(shù)無明顯差別（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學意義。假手術組腦細胞凋亡數(shù)：3.45±0.95個；HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應用組腦細胞凋亡在6h分別為48.12±8.86、41.04±6.39、39.8±7.38、33.8±9.38；24h分別為58.12±7.84、49.36±7.83、50.31±6.86、

8、36.14±6.32；72h分別為66.38±8.18、54.32±8.01、53.62±5.89、40.13±8.23；7d分別為56.46±6.78、34.23±7.16、36.37±6.25、25.36±4.48。（5）外周血細胞變化：rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應用組與HIBD組、假手術組比較各個時間點外周血中白細胞（WBC）、紅細胞(RBC)值無顯著升高（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學意義；rhG-CSF組、rh-EP

9、O組分別治療組在各個時間點外周血中白細胞、紅細胞與聯(lián)合應用組值無顯著升高（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學意義。假手術組、HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應用組外周血中WBC（×109/L）值分別為：6h為5.37±1.18、5.48±1.79、6.86±1.54、6.41±1.68、7.15±1.79；24h為6.77±2.29、7.17±2.91、8.26±2.48、6.07±1.83、7.44±2.42；72h為6.

10、91±1.52、6.49±2.93、7.08±1.75、7.47±2.74、8.31±1.82；7d為6.69±1.18、6.53±2.01、7.65±1.48、7.31±2.21、8.53±1.73；RBC（×1012/L）值分別為：6h為3.15±0.29、3.28±0.37、3.13±0.31、3.33±0.41、3.32±0.43；24h為3.13±0.31、3.23±0.33、3.23±0.39、3.34±0.43、3.45±

11、0.43；72h為3.12±0.33、3.28±0.12、3.23±0.35、3.44±0.41、3.49±0.45；7d為3.23±0.33、3.28±0.32、3.25±0.35、3.54±0.46、3.51±0.42。
　　結論：（1）rh-EPO、rhG-CSF聯(lián)合應用比單一應用對7日齡SD大鼠HIBD后更能明顯改善腦組織的水腫、壞死等病理改變，說明rhG-CSF或rh-EPO對新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護作用，兩者聯(lián)合應