丹參和補(bǔ)骨脂的體外抑菌活性及隱丹參酮、二氫丹參酮Ⅰ的抑菌機(jī)制研究.pdf

1、本論文由三章組成。第一章綜述了目前中藥抑菌機(jī)制研究方法的進(jìn)展。第二章研究了丹參和補(bǔ)骨脂生品及炮制品體外抑制會(huì)黃色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)和β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑菌圈、最低抑菌濃度(MIC值)及半數(shù)抑菌濃度(IC50值)。第三章研究了隱丹參酮和二氫丹參酮Ⅰ對(duì)SA、MRSA和ESBLs-SA的電導(dǎo)率、堿性磷酸酶(AKP)、胞外蛋白含量及SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化的研究。

2、
　　 第一章：中藥抑菌機(jī)制方法研究進(jìn)展
　　 本章通過(guò)對(duì)中藥抑菌機(jī)制方法有關(guān)文獻(xiàn)的檢索，綜述了中藥抑菌機(jī)制方法的研究進(jìn)展。
　　 第二章：丹參、補(bǔ)骨脂生品及炮制品的體外抗菌活性研究
　　 采用紙片擴(kuò)散法(K-B法)測(cè)定了丹參生品及炮制品的抑菌圈和最低抑菌濃度(MIC)，液體培養(yǎng)法測(cè)定了半數(shù)抑菌濃度(IC50值)。
　　 抑菌圈顯示，炒丹參和酒丹參的抑菌活性較對(duì)應(yīng)的生品活性增強(qiáng)，而丹參炭的抑菌活性

3、明顯減弱，但仍具有一定的抑菌活性；其中炒丹參的甲醇總提取物濃度在50mg/mL時(shí)對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌圈直徑最大，均為20mm。MIC值顯示，丹參生品及炮制品的體外抗菌活性是：甲醇總提取物>石油醚和乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物，說(shuō)明丹參抗菌作用的活性成分主要存在于極性較小的石油醚部位和乙酸乙酯部位。IC50值顯示，對(duì)SA，炒丹參(乙酸乙酯部位，IC50=0.26mg/mL)的抑菌活性最好；對(duì)MRSA，炒丹參(乙酸乙酯部

4、位，IC50=0.13mg/mL)的抑菌活性最好；對(duì)ESBLs-SA，丹參生品(石油醚部位，IC50=0.31mg/mL)和炒丹參(石油醚部位，IC50=0.31mg/mL)的抑菌活性最好。
　　 綜上證明丹參生品及不同炮制品對(duì)SA、MRSA和ESBLs-SA的抑制作用明顯，不同炮制方法對(duì)丹參的抗菌作用產(chǎn)生了影響。
　　 采用K-B法測(cè)定了補(bǔ)骨脂生品及炮制品的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測(cè)定了IC50值。
　　

5、抑菌圈顯示，酒炙補(bǔ)骨脂的甲醇總提取物和石油醚部位在濃度為50mg/mL時(shí)對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌圈均為12mm，活性最好；補(bǔ)骨脂甲醇總提取物和石油醚部位的活性明顯好于乙酸乙酯部位和正丁醇部位的活性，經(jīng)炮制后乙酸乙酯部位和正丁醇部位均較生品的抗菌活性增加。MIC值顯示，石油醚部位是補(bǔ)骨脂生品主要的抑菌活性部位，對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的MIC值均為31.3μg/disc。IC50值顯示，對(duì)SA，酒炙補(bǔ)骨脂(石油醚

6、部位，IC50=0.10mg/ml)的抑制活性最好；對(duì)MRSA，補(bǔ)骨脂生品(甲醇總提取物，IC50=0.16mg/ml)的抑制活性最好；對(duì)ESBLs-SA，鹽蒸補(bǔ)骨脂(甲醇總提取物，IC50=0.28mg/ml)的抑制活性最好。
　　 綜上所述，補(bǔ)骨脂生品和炮制后的補(bǔ)骨脂對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的抑制作用明顯，尤其是酒炙補(bǔ)骨脂抑菌活性增強(qiáng)的較顯著，不同炮制方法對(duì)補(bǔ)骨脂的抗菌作用產(chǎn)生了影響。
　　 第三章：隱丹參

7、酮和二氫丹參酮Ⅰ的抑菌機(jī)制研究
　　 采用K-B法測(cè)定了隱丹參酮的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測(cè)定了IC50值。抑菌圈顯示，隱丹參酮對(duì)SA的抑制作用略強(qiáng)于MRSA和ESBLs-SA，隱丹參酮在濃度為5mg/mL時(shí)對(duì)SA的抑菌圈(15mm)大于對(duì)MRSA和ESBLs-SA的抑菌圈(13mm)；MIC值顯示，隱丹參酮對(duì)SA的活性最好(MIC=0.078mg/mL；IC50值顯示，隱丹參酮對(duì)SA的活性最好(IC50=0.092±0.0

8、3.mg/mL)。
　　 通過(guò)測(cè)定電導(dǎo)率變化、堿性磷酸酶(AKP)的含量變化、胞外蛋白含量變化和SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化，研究了隱丹參酮對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌機(jī)制。
　　 抑菌機(jī)制研究結(jié)果顯示經(jīng)隱丹參酮作用后，SA、MRSA、ESBLs-SA的電導(dǎo)率、AKP及可溶性蛋白含量均增大，SDS-PAGE電泳顯示蛋白譜帶也明顯發(fā)生變化。說(shuō)明隱丹參酮可能破壞了細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加

9、，進(jìn)而使細(xì)胞內(nèi)容物外泄；同時(shí)推測(cè)隱丹參酮對(duì)細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成有一定影響，使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)減少，影響和阻礙細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)，最終導(dǎo)致細(xì)菌正常生理功能受損或喪失。
　　 采用K-B法測(cè)定了二氫丹參酮Ⅰ的抑菌圈和MIC值，液體培養(yǎng)法測(cè)定了IC50值。抑菌圈顯示，二氫丹參酮Ⅰ在濃度為5mg/mL對(duì)SA的抑菌圈(12mm)大于對(duì)MRSA和ESBLS-SA的抑菌圈(10mm)；MIC值顯示，對(duì)SA的活性最好(MIC=0.078mg/mL)；I

10、C50值顯示，對(duì)SA、MRSA、ESBLS-SA的活性順序：SA(IC50=0.243±0.01mg/mL)>ESBLs-SA(IC50=0.280±0.00mg/mL)>MRSA(IC50=0.539±0.03mg/mL)。
　　 通過(guò)測(cè)定電導(dǎo)率變化、堿性磷酸酶(AKP)的含量變化、胞外蛋白含量變化和SDS-PAGE電泳蛋白譜帶變化，研究了二氫丹參酮Ⅰ對(duì)SA、MRSA、ESBLs-SA的抑菌機(jī)制。
　　 抑菌機(jī)制研究結(jié)