重組人促紅細(xì)胞生成素聯(lián)合自體外周血干細(xì)胞移植治療豬急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在通過研究G-CSF動員后分離、采集自體外周血干細(xì)胞經(jīng)皮經(jīng)腔冠脈內(nèi)移植聯(lián)合EPO治療豬急性心肌梗死，觀察其對心肌細(xì)胞病理學(xué)改變及細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法：健康小型豬30只，隨機(jī)分為5組，每組6只。動物單純干細(xì)胞移植組(SC)、單純促紅細(xì)胞生成素組(EPO)、EPO聯(lián)合SC組(EPO+SC)、AMI對照組（control），假手術(shù)組(sham)。其中4組采用經(jīng)皮穿刺球囊封堵冠狀動脈左前降支的方法建立豬急性心肌梗死

2、模型，1組行假手術(shù)。SC組建模后1h給予G-CSF連用7天，建模第8天采用血細(xì)胞分離機(jī)單采PBSC，通過IRA通道回輸PBSC。EPO+SC組建模后1h給予G-CSF連用7天，rHu-EPO連續(xù)5天，并于建模后第8天以相同方法采集、標(biāo)記、回輸PBSC。EPO組建模后給予rHu-EPO注射連續(xù)5天，于第8天經(jīng)IRA回輸與SC組相同容量的生理鹽水。Control組及sham組建模后僅經(jīng)IRA回輸相同容量的生理鹽水。采用蘇木精-依紅(HE)染

3、色觀察心肌組織形態(tài);TUNEL染色方法檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù);Western-blot方法檢測心肌梗死區(qū)域心肌組織中凋亡蛋白Bax、Caspase-3，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：建模過程中因麻醉過量、室顫各死亡1只實(shí)驗(yàn)動物，剩余30只成功建模。HE染色:sham組可見心肌細(xì)胞排列整齊，心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整;control組可見梗死區(qū)大片心肌細(xì)胞連續(xù)性壞死，梗死邊緣區(qū)存在大量炎癥細(xì)胞浸潤及纖維組織增生;EPO組與SC組

4、心肌梗死區(qū)心肌組織相似，纖維化程度及炎性細(xì)胞浸潤情況較輕，期間散在分布正常心肌細(xì)胞;EPO+SC組心梗部位心肌組織可見更多正常心肌細(xì)胞，纖維化程度輕，邊緣少量炎性細(xì)胞浸潤。TUNEL結(jié)果:EPO+SC組凋亡指數(shù)顯著低于對照組（37.93±12.60％ vs75.70±15.50％，p＜0.01），EPO組凋亡指數(shù)與EPO+SC組相比較高（54.08±16.06％vs37.93±12.60％，p=0.047），EPO組與SC組凋亡指數(shù)均低