rBTI體內(nèi)外誘導(dǎo)小鼠肝癌細胞株H22的凋亡研究.pdf

1、細胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主有序的死亡。它涉及一系列基因的激活、表達以及調(diào)控等作用;它并不是病理條件下自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的一種井然有序的死亡過程。這種自毀性的過程通常由caspase-3作為主要的執(zhí)行者使caspase系列級聯(lián)放大而實現(xiàn)。目前在哺乳動物細胞中有關(guān)細胞凋亡的途徑主要有兩種:線粒體途徑和死亡受體途徑。前者，凋亡信號激發(fā)了細胞色素c從線粒體間隙釋放到細胞質(zhì)中，形成了Ap

2、af-1和dATP復(fù)合物，進而可增強caspase-3的活性，最終啟動一系列的凋亡事件并使細胞死亡。外源性途徑開始于一個死亡受體，如Fas等。當Fas配體與Fas死亡受體結(jié)合時，結(jié)合的大分子與另一個受體結(jié)合，進而介導(dǎo)凋亡。
　　本文目的是研究重組蕎麥胰蛋白酶抑制劑(rBTI)抑制癌細胞增殖的作用及其機制。采用細胞培養(yǎng)技術(shù)，以肝癌細胞系H22為靶細胞，以不同濃度的rBTI體外處理細胞不同時間后，采用MTT檢測、DNA電泳分析、細胞核

3、形態(tài)學(xué)觀察、細胞色素c檢測、caspase活性檢測等方法測定rBTI在體外誘導(dǎo)肝癌細胞H22凋亡的作用。結(jié)果顯示rBTI能夠在體外特異性的抑制H22細胞的生長，誘導(dǎo)H22細胞凋亡，且隨著rBTI濃度及作用時間的增加，呈現(xiàn)劑量和時間依賴性效應(yīng)，但對正常人肝細胞7702沒有影響。
　　為了研究在體內(nèi)rBTI是否具有同樣的效果以及屬于細胞凋亡的哪條途徑，我們在小體鼠內(nèi)進行了rBTI對H22肝癌細胞株增殖影響的研究。通過小鼠體內(nèi)抗腫瘤實驗

4、，初步研究考察rBTI體內(nèi)的抗腫瘤活性，證明在經(jīng)rBTI治療后的小鼠體內(nèi)的腹水瘤得到抑制，同時rBTI能夠明顯的抑制移植性實體瘤的形成。機理研究初步表明，經(jīng)rBTI處理的細胞可導(dǎo)致細胞色素c從線粒體釋放到細胞質(zhì)中，并能增強caspase-3，8，9的活性。結(jié)論，rBTI能特異性地誘導(dǎo)H22細胞凋亡，并能有效的抑制H22腹水瘤和移植性實體瘤的形成，其機制與caspase-3依賴性凋亡調(diào)節(jié)信號通路有關(guān)。在rBTI的發(fā)酵條件研究中，應(yīng)用搖瓶試